| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-23页 |
| 1.1 鸡球虫病的耐药现状 | 第16页 |
| 1.2 基因差异表达在寄生虫耐药性的研究 | 第16-17页 |
| 1.3 单核苷酸多态性在寄生虫上的应用 | 第17-22页 |
| 1.3.1 SNP分子标记在原虫上的应用 | 第17-19页 |
| 1.3.2 SNP分子标记在蠕虫上的应用 | 第19-21页 |
| 1.3.3 SNP分子标记在节肢动物上的应用 | 第21-22页 |
| 1.4 展望 | 第22-23页 |
| 第二章 4个耐药相关基因的克隆和生物信息学分析 | 第23-42页 |
| 2.1 引言 | 第23-24页 |
| 2.2 材料与方法 | 第24-33页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第24页 |
| 2.2.2 实验虫株和原核表达载体 | 第24页 |
| 2.2.3 实验药物 | 第24页 |
| 2.2.4 实验主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.5 实验主要设备 | 第25-26页 |
| 2.2.6 实验步骤 | 第26-27页 |
| 2.2.7 总RNA提取和cDNA模板的制备 | 第27-28页 |
| 2.2.8 耐药相关基因的扩增和测序 | 第28-30页 |
| 2.2.9 生物信息学分析 | 第30页 |
| 2.2.10 4个耐药相关基因在4个不同发育阶段转录水平的差异分析 | 第30-33页 |
| 2.3 结果 | 第33-40页 |
| 2.3.1 4个不同发育阶段虫体的收集和纯化 | 第33页 |
| 2.3.2 柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊总RNA的提取 | 第33-34页 |
| 2.3.3 4个耐药相关基因的克隆 | 第34-35页 |
| 2.3.4 4个耐药相关基因的生物信息学分析 | 第35-39页 |
| 2.3.5 4个耐药相关基因在不同发育阶段的转录水平差异分析 | 第39-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 4个耐药相关基因原核重组蛋白的表达和功能初步分析 | 第42-71页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 材料与方法 | 第42-51页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第42页 |
| 3.2.2 实验虫株、原核表达载体和细胞 | 第42页 |
| 3.2.3 实验主要试剂 | 第42-43页 |
| 3.2.4 实验主要设备 | 第43页 |
| 3.2.5 重组表达质粒的构建与鉴定 | 第43-45页 |
| 3.2.6 重组表达质粒的诱导表达 | 第45-46页 |
| 3.2.7 重组蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| 3.2.8 4个耐药相关基因重组蛋白多克隆抗体的制备与抗体的纯化 | 第47页 |
| 3.2.9 重组蛋白的反应原性分析 | 第47-48页 |
| 3.2.10 4个耐药相关基因在3个虫株体内的转录和翻译水平差异 | 第48页 |
| 3.2.11 3-磷酸甘油醛脱氢酶活性的测定 | 第48-49页 |
| 3.2.12 苹果酸脱氢酶活性的测定 | 第49页 |
| 3.2.13 DF-1细胞的复苏与传代培养 | 第49页 |
| 3.2.14 4个耐药相关基因在球虫入侵DF-1细胞不同发育阶段的分布与定位分析 | 第49-50页 |
| 3.2.15 兔抗重组蛋白多克隆抗体对子孢子入侵DF-1细胞的体外抑制实验 | 第50页 |
| 3.2.16 4个耐药相关基因在球虫不同的发育阶段中蛋白质翻译水平的差异 | 第50-51页 |
| 3.3 结果 | 第51-68页 |
| 3.3.1 原核重组表达质粒的构建和鉴定 | 第51-52页 |
| 3.3.2 重组蛋白的表达和纯化 | 第52-55页 |
| 3.3.3 兔抗重组蛋白多克隆抗体的制备 | 第55-56页 |
| 3.3.4 重组蛋白反应原性的分析 | 第56-57页 |
| 3.3.5 耐药相关基因在3个虫株体内的转录和翻译 | 第57-60页 |
| 3.3.6 酶活实验 | 第60-61页 |
| 3.3.7 4个耐药相关基因蛋白在虫体的分布 | 第61-64页 |
| 3.3.8 2个耐药基因重组蛋白多克隆抗体对子孢子入侵DF-1细胞的体外抑制实验 | 第64-66页 |
| 3.3.9 4个耐药相关基因在球虫不同发育阶段的蛋白翻译水平差异 | 第66-68页 |
| 3.4 讨论 | 第68-71页 |
| 第四章 基于全基因组重测序的敏感株与耐药株SNP位点筛选 | 第71-82页 |
| 4.1 引言 | 第71页 |
| 4.2 材料与方法 | 第71-75页 |
| 4.2.1 实验动物与虫株 | 第71页 |
| 4.2.2 饲料 | 第71页 |
| 4.2.3 实验药物 | 第71-72页 |
| 4.2.4 实验试剂和设备 | 第72页 |
| 4.2.5 DS、DZR和MRR孢子化卵囊的繁殖和纯化 | 第72页 |
| 4.2.6 DS、DZR和MRR孢子化卵囊基因组DNA的提取 | 第72-73页 |
| 4.2.7 DNA样品文库的构建 | 第73页 |
| 4.2.8 DS、DZR和MRR孢子化卵囊的全基因组重测序 | 第73-75页 |
| 4.3 结果 | 第75-80页 |
| 4.3.1 DS、DZR和MRR基因组DNA的提取 | 第75页 |
| 4.3.2 DS、DZR和MRR全基因组重测序 | 第75-80页 |
| 4.3.3 耐药相关位点的筛选 | 第80页 |
| 4.4 讨论 | 第80-82页 |
| 第五章 全文结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 作者简历 | 第93页 |
