| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第9-14页 |
| 1.1 节律基因简介 | 第9页 |
| 1.2 节律基因的研究进展 | 第9-10页 |
| 1.3 启动子的相关研究进展 | 第10页 |
| 1.3.1 植物基因启动子的结构及分类 | 第10页 |
| 1.3.2 植物基因启动子的克隆方法 | 第10页 |
| 1.4 节律基因与非生物胁迫 | 第10-11页 |
| 1.5 植物DNA甲基化研究背景 | 第11-12页 |
| 1.6 植物DNA甲基化研究方法 | 第12页 |
| 1.6.1 高效液相色谱法 | 第12页 |
| 1.6.2 亚硫酸盐处理测序法 | 第12页 |
| 1.6.3 MSAP法 | 第12页 |
| 1.6.4 荧光法 | 第12页 |
| 1.7 表观修饰与杂种优势 | 第12-13页 |
| 1.8 本研究的目的意义 | 第13-14页 |
| 2 水曲柳LHY基因启动子的克隆及其活性分析 | 第14-28页 |
| 2.1 试验材料 | 第14页 |
| 2.2 试验方法 | 第14-20页 |
| 2.2.1 水曲柳LHY基因启动子的克隆和生物信息学分析 | 第14-17页 |
| 2.2.2 LHY启动子pPXGFP-P植物瞬时表达载体的构建 | 第17-18页 |
| 2.2.3 LHY启动子pPCXGUS-P植物表达载体的构建 | 第18-19页 |
| 2.2.4 表达载体导入农杆菌 | 第19页 |
| 2.2.5 LHY启动子在烟草中的瞬时表达 | 第19-20页 |
| 2.2.6 LHY启动子在烟草中的表达活性分析 | 第20页 |
| 2.3 结果与分析 | 第20-26页 |
| 2.3.1 水曲柳基因组DNA提取 | 第20页 |
| 2.3.2 水曲柳LHY基因启动子克隆 | 第20-21页 |
| 2.3.3 重组质粒PCR鉴定及测序结果 | 第21-22页 |
| 2.3.4 水曲柳LHY基因启动子顺式作用元件的鉴定及分析 | 第22-24页 |
| 2.3.5 pPXGFP-P和pPCXGUS-P植物表达载体的构建与鉴定 | 第24页 |
| 2.3.6 瞬时GFP活性检测 | 第24-25页 |
| 2.3.7 GUS组织化学染色 | 第25-26页 |
| 2.4 讨论 | 第26页 |
| 2.5 本章小结 | 第26-28页 |
| 3 节律基因LHY启动子对非生物胁迫的响应 | 第28-37页 |
| 3.1 试验材料及试剂 | 第28页 |
| 3.2 试验方法 | 第28-31页 |
| 3.2.1 非生物胁迫下LHY启动子在白桦细胞中的瞬时表达 | 第28页 |
| 3.2.2 LHY启动子诱导活性在烟草中的定量研究 | 第28-31页 |
| 3.2.2.1 GUS酶活性的定量 | 第28-29页 |
| 3.2.2.2 GUS基因的定量 | 第29-31页 |
| 3.3 结果与分析 | 第31-35页 |
| 3.3.1 非生物胁迫下LHY启动子活性 | 第31-32页 |
| 3.3.2 蛋白含量标准曲线 | 第32页 |
| 3.3.3 对硝基苯酚标准曲线 | 第32-33页 |
| 3.3.4 GUS酶活力的定量分析 | 第33-34页 |
| 3.3.5 烟草总RNA完整性检测 | 第34页 |
| 3.3.6 cDNA合成效果的检测 | 第34-35页 |
| 3.3.7 GUS基因荧光定量PCR分析 | 第35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-36页 |
| 3.5 本章小结 | 第36-37页 |
| 4 节律基因LHY启动子区及编码区甲基化分析 | 第37-47页 |
| 4.1 试验材料 | 第37页 |
| 4.2 试验方法 | 第37-39页 |
| 4.2.1 亚硫酸盐测序法 | 第37-38页 |
| 4.2.2 LHY编码区干旱胁迫定量分析 | 第38-39页 |
| 4.2.2.1 水曲柳基因组总RNA的提取 | 第38页 |
| 4.2.2.2 反转录获得cDNA | 第38页 |
| 4.2.2.3 荧光定量PCR | 第38-39页 |
| 4.3 结果与分析 | 第39-45页 |
| 4.3.1 水曲柳基因组DNA提取 | 第39页 |
| 4.3.2 BSP扩增结果 | 第39页 |
| 4.3.3 LHY基因启动子区甲基化分析 | 第39-42页 |
| 4.3.4 LHY基因编码区甲基化分析 | 第42-43页 |
| 4.3.5 水曲柳总RNA完整性检测 | 第43-44页 |
| 4.3.6 cDNA合成效果的检测 | 第44页 |
| 4.3.7 荧光定量PCR | 第44-45页 |
| 4.4 讨论 | 第45-46页 |
| 4.5 本章小结 | 第46-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
