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凋亡诱导因子在肾癌中表达下调的机制及其功能研究

摘要第4-6页
Abstract第6-8页
第1章 绪论第15-34页
    1.1 课题来源及研究目的和意义第15页
    1.2 肾癌的特点及其分子机制第15-19页
        1.2.1 肾癌的流行病学及细胞病理学特点第16-17页
        1.2.2 肾癌的分子生物学特征第17-19页
    1.3 AIF的结构与基本功能第19-28页
        1.3.1 AIF的基本结构、功能域和异构体第20-22页
        1.3.2 AIF的相互作用因子第22-23页
        1.3.3 AIF与细胞程序性死亡第23-26页
        1.3.4 AIF与肿瘤第26-28页
    1.4 STK3结构、功能与研究进展第28-31页
        1.4.1 STK3基本结构第28-29页
        1.4.2 STK3功能及在癌症中的研究近况第29-31页
    1.5 主要研究内容和技术路线第31-34页
        1.5.1 主要研究内容第31-33页
        1.5.2 技术路线第33-34页
第2章 实验材料与方法第34-51页
    2.1 实验材料第34-39页
        2.1.1 细胞系第34页
        2.1.2 菌株第34页
        2.1.3 临床病理组织第34页
        2.1.4 引物合成第34-35页
        2.1.5 质粒载体第35页
        2.1.6 抗体第35-36页
        2.1.7 其他试剂第36-37页
        2.1.8 常用缓冲液第37-39页
        2.1.9 实验仪器第39页
    2.2 实验方法第39-50页
        2.2.1 重组体构建第39-40页
        2.2.2 肾癌组织和细胞系总蛋白的提取第40页
        2.2.3 肾癌组织和细胞系基因组DNA提取第40-41页
        2.2.4 荧光原位杂交技术第41-43页
        2.2.5 Southern Blot杂交第43-44页
        2.2.6 癌症表达谱阵列分析第44-45页
        2.2.7 基于亚硫酸氢盐处理的甲基化分析第45-46页
        2.2.8 培养细胞的DNA甲基化酶抑制剂处理第46页
        2.2.9 GST融合蛋白pull-down技术第46-48页
        2.2.10 谱鉴定第48页
        2.2.11 免疫共沉淀第48-49页
        2.2.12 免疫荧光技术第49页
        2.2.13 基于Annexin V-FITC/PI双染的细胞凋亡分析第49-50页
        2.2.14 统计学处理第50页
    2.3 本章小结第50-51页
第3章 AIF在肾癌中的表达分析第51-65页
    3.1 引言第51页
    3.2 AIF在不同组织类型癌症中的表达分析第51-54页
    3.3 AIF在肾癌临床样品中表达显著性下调第54-62页
        3.3.1 肾癌组织样品AIF免疫印记分析第54-55页
        3.3.2 肾癌组织样品AIF免疫组化分析第55-62页
    3.4 AIF在肾癌细胞系中的表达检测第62-64页
    3.5 本章小结第64-65页
第4章 在肾癌中AIF表达下调的机制分析第65-83页
    4.1 引言第65页
    4.2 肾癌组织基因组DNA中AIF缺失分析第65-73页
        4.2.1 肾癌组织中AIF基因组DNASouthern Blot杂交分析第66-70页
        4.2.2 肾癌组织中AIF基因缺失的FISH技术分析第70-73页
    4.3 AIF启动子区DNA甲基化分析第73-81页
        4.3.1 肾癌组织中AIF启动子区 450 bp范围甲基化分析第73-75页
        4.3.2 肾癌组织中AIF启动子区 1500 bp范围甲基化分析第75-78页
        4.3.3 DNA甲基转移酶抑制剂对肾癌细胞AIF表达的影响第78-81页
    4.4 本章小结第81-83页
第5章 在肾癌细胞中AIF的相互作用因子分析第83-95页
    5.1 引言第83页
    5.2 AIF重组体的构建第83-84页
    5.3 AIF融合蛋白的GST pull-down实验第84-88页
    5.4 AIF相互作用蛋白的质谱分析第88-91页
    5.5 AIF与STK3的免疫共沉淀分析第91-93页
    5.6 本章小结第93-95页
第6章 AIF对肾癌细胞增殖和凋亡的影响第95-111页
    6.1 引言第95页
    6.2 AIF过表达对肾癌细胞中信号通路的影响第95-98页
    6.3 过表达AIF促进肾癌细胞凋亡第98-103页
    6.4 AIF核转位引起肾癌细胞凋亡第103-106页
    6.5 AIF表达抑制对细胞增殖的影响第106-109页
    6.6 本章小结第109-111页
结论第111-113页
参考文献第113-124页
攻读博士学位期间发表的论文及其它成果第124-126页
致谢第126-127页
个人简历第127页

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