| 项目资助 | 第6页 |
| ACKNOWLEDGEMENTS | 第6-7页 |
| 致谢 | 第7-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 主要缩略词 | 第13-16页 |
| 1 文献综述 | 第16-43页 |
| 1.1 耐辐射奇球菌研究进展 | 第16-24页 |
| 1.1.1 耐辐射奇球菌概述 | 第16-19页 |
| 1.1.2 耐辐射奇球菌辐射抗性机制研究进展 | 第19-24页 |
| 1.1.3 其他耐辐射奇球菌特有的修复相关蛋白 | 第24页 |
| 1.2 碱基错配修复(MMR)系统及MutS2蛋白的研究进展 | 第24-30页 |
| 1.2.1 大肠杆菌MMR系统 | 第24-25页 |
| 1.2.2 MutS蛋白的同源物 | 第25-26页 |
| 1.2.3 MutS2蛋白及其研究进展 | 第26-27页 |
| 1.2.4 Smr(The small MutS-related domain) | 第27-30页 |
| 1.3 金属β-内酰胺酶家族研究进展 | 第30-37页 |
| 1.3.1 金属β-内酰胺酶家族简介 | 第30-32页 |
| 1.3.2 RNase Z亚家族 | 第32页 |
| 1.3.3 β-CASP亚家族 | 第32-37页 |
| 1.4 蛋白质结晶及X射线衍射技术概述 | 第37-43页 |
| 1.4.1 蛋白质结晶的原理及方法 | 第38-39页 |
| 1.4.2 蛋白质结晶的影响因素 | 第39-40页 |
| 1.4.3 诱导成核的方法——Seeding | 第40-41页 |
| 1.4.4 蛋白质与DNA的共结晶 | 第41页 |
| 1.4.5 Soaking | 第41页 |
| 1.4.6 X射线衍射基本原理及数据分析 | 第41-43页 |
| 2 耐辐射奇球菌MutS2的结构与功能研究 | 第43-72页 |
| 2.1 前言 | 第43页 |
| 2.2 材料和方法 | 第43-55页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第43-45页 |
| 2.2.2 主要试剂和仪器 | 第45页 |
| 2.2.3 各种突变株及补偿株的构建 | 第45-47页 |
| 2.2.4 生长曲线及重组率的测定 | 第47页 |
| 2.2.5 生存率的测定 | 第47-48页 |
| 2.2.6 抗氧化活性分析 | 第48-49页 |
| 2.2.7 实时定量PCR | 第49-50页 |
| 2.2.8 drSmr_(680)和drSmr_(622)表达菌株的构建 | 第50-51页 |
| 2.2.9 蛋白的表达与纯化 | 第51-52页 |
| 2.2.10 定点突变蛋白的构建 | 第52-53页 |
| 2.2.11 核酸酶活性实验 | 第53-54页 |
| 2.2.12 DNA结合活性的测定 | 第54页 |
| 2.2.13 drSmr_(680)晶体筛选及生长 | 第54页 |
| 2.2.14 drSmr_(680)晶体X射线衍射数据的收集及蛋白结构的解析 | 第54-55页 |
| 2.3 结果与分析 | 第55-68页 |
| 2.3.1 各种突变株及补偿株的构建 | 第55-56页 |
| 2.3.2 △mutS2生长曲线和重组率的测定 | 第56-57页 |
| 2.3.3 生存率的测定 | 第57-59页 |
| 2.3.4 △mutS2突变株的抗氧化活性分析 | 第59-60页 |
| 2.3.5 实时定量PCR | 第60-62页 |
| 2.3.6 drSmr_(680)和drSmr_(622)蛋白的表达纯化 | 第62页 |
| 2.3.7 drSmr_(680)具有核酸酶活性 | 第62-64页 |
| 2.3.8 drSmr_(622)蛋白的DNA结合活性比drSmr_(680)高 | 第64-65页 |
| 2.3.9 drSmr_(6800蛋白晶体结构与ttSmr基本相似 | 第65-67页 |
| 2.3.10 E710是drSmr蛋白的活性位点之一 | 第67-68页 |
| 2.4 讨论 | 第68-70页 |
| 2.5 总结与展望 | 第70-72页 |
| 3 耐辐射奇球菌DncA的结构与功能研究 | 第72-108页 |
| 3.1 前言 | 第72页 |
| 3.2 材料和方法 | 第72-81页 |
| 3.2.1 菌株和试剂 | 第72-74页 |
| 3.2.2 表达菌株的构建 | 第74页 |
| 3.2.3 定点突变 | 第74-75页 |
| 3.2.4 蛋白的表达及条件优化 | 第75-76页 |
| 3.2.5 蛋白纯化 | 第76-78页 |
| 3.2.6 蛋白结晶条件的筛选及优化 | 第78页 |
| 3.2.7 晶体衍射数据收集与处理 | 第78页 |
| 3.2.8 核酸酶活性实验 | 第78-80页 |
| 3.2.9 突变株的构建 | 第80页 |
| 3.2.10 生长曲线和表型测定 | 第80-81页 |
| 3.3 结果与分析 | 第81-104页 |
| 3.3.1 蛋白表达与诱导条件优化 | 第81-82页 |
| 3.3.2 蛋白纯化 | 第82-86页 |
| 3.3.3 DncA蛋白核酸酶活性 | 第86-92页 |
| 3.3.4 DncA蛋白的三维结构研究 | 第92-98页 |
| 3.3.5 分子筛法确定DncA_D175A点突变蛋白在溶液中的低聚物状态 | 第98-99页 |
| 3.3.6 DncA蛋白C-末端的作用 | 第99-101页 |
| 3.3.7 突变株构建及表型分析 | 第101-104页 |
| 3.4 讨论 | 第104-106页 |
| 3.5 总结与展望 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-115页 |
| 附录 | 第115-121页 |
| 博士期间发表论文 | 第121页 |
