| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 英文缩写词表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1. 黄绿青霉素研究概况 | 第13-18页 |
| 1.1 黄绿青霉菌的生长及产毒 | 第13-14页 |
| 1.2 黄绿青霉素的理化性质 | 第14-15页 |
| 1.3 黄绿青霉素的毒理作用 | 第15-17页 |
| 1.4 黄绿青霉素的检测方法 | 第17-18页 |
| 2. 单克隆抗体技术 | 第18-23页 |
| 2.1 单克隆抗体研究背景 | 第18-19页 |
| 2.2 杂交瘤技术原理简述 | 第19-20页 |
| 2.2.1 动物免疫 | 第19页 |
| 2.2.2 细胞融合 | 第19-20页 |
| 2.2.3 杂交瘤细胞的筛选 | 第20页 |
| 2.3 单克隆抗体的大量制备 | 第20-22页 |
| 2.3.1 小鼠体内诱生单克隆抗体 | 第20-21页 |
| 2.3.2 体外培养法 | 第21页 |
| 2.3.3 体内体外结合法 | 第21-22页 |
| 2.4 单克隆抗体的应用前景 | 第22-23页 |
| 2.5 国内外抗体药物产业现状 | 第23页 |
| 3. 本课题的研究目的及意义 | 第23-25页 |
| 第二章 黄绿青霉素人工完全抗原的制备 | 第25-43页 |
| 1. 实验材料 | 第25-26页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第25-26页 |
| 1.2 实验仪器设备 | 第26页 |
| 2. 实验方法 | 第26-31页 |
| 2.1 黄绿青霉素人工完全抗原的制备 | 第26-27页 |
| 2.2 人工完全抗原制备的鉴定 | 第27-31页 |
| 2.2.1 人工完全抗原的薄层层析检测 | 第27-28页 |
| 2.2.2 BCA法测定偶联物的蛋白浓度 | 第28页 |
| 2.2.3 人工完全抗原的非变性琼脂糖凝胶电泳分析 | 第28页 |
| 2.2.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定人工完全抗原 | 第28-29页 |
| 2.2.5 人工完全抗原的紫外光谱扫描检测 | 第29页 |
| 2.2.6 人工免疫抗原的红外光谱扫描检测 | 第29-30页 |
| 2.2.7 人工完全抗原的免疫效果分析 | 第30-31页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第31-40页 |
| 3.1 人工完全抗原的合成原理 | 第31页 |
| 3.2 人工完全抗原薄层层析检测结果分析 | 第31-32页 |
| 3.3 人工完全抗原蛋白浓度测定结果分析 | 第32-33页 |
| 3.4 人工完全抗原的非变性琼脂糖凝胶电泳结果分析 | 第33-34页 |
| 3.5 人工完全抗原的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果分析 | 第34-35页 |
| 3.6 人工完全抗原的紫外分光光度检测结果分析 | 第35-37页 |
| 3.7 人工完全抗原的红外光谱检测结果分析 | 第37-38页 |
| 3.8 人工完全抗原的免疫效果结果分析 | 第38-40页 |
| 4. 讨论 | 第40-42页 |
| 4.1 关于人工完全抗原构建的问题 | 第40页 |
| 4.2 关于偶联载体的选择 | 第40-41页 |
| 4.3 关于完全抗原偶联方法的问题 | 第41页 |
| 4.4 关于人工完全抗原的鉴定 | 第41-42页 |
| 5. 小结 | 第42-43页 |
| 第三章 抗黄绿青霉素单克隆抗体的制备 | 第43-69页 |
| 1. 材料 | 第43-45页 |
| 1.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 1.2 实验动物 | 第44页 |
| 1.3 主要仪器 | 第44-45页 |
| 2. 实验方法 | 第45-56页 |
| 2.1 小鼠免疫 | 第45-46页 |
| 2.2 抗血清的采集 | 第46页 |
| 2.3 血清效价的测定 | 第46-47页 |
| 2.4 iELISA筛选体系的建立 | 第47-49页 |
| 2.4.1 羊抗鼠HRP-IgG最佳抗体浓度的确定 | 第47-48页 |
| 2.4.2 最佳包被抗原与抗血清浓度的确定 | 第48页 |
| 2.4.3 最佳封闭液的选择 | 第48-49页 |
| 2.4.4 一抗的最佳稀释液选择 | 第49页 |
| 2.4.5 二抗的最佳稀释液的选择 | 第49页 |
| 2.5 小鼠血清特异性的检测 | 第49-50页 |
| 2.6 细胞的复苏 | 第50页 |
| 2.7 细胞的冻存 | 第50-51页 |
| 2.8 饲养细胞的制备 | 第51页 |
| 2.9 骨髓瘤细胞培养 | 第51-52页 |
| 2.10 细胞融合准备 | 第52-53页 |
| 2.10.1 制备骨髓瘤细胞 | 第52页 |
| 2.10.2 脾细胞的制备 | 第52页 |
| 2.10.3 细胞融合 | 第52-53页 |
| 2.11 融合细胞的培养 | 第53页 |
| 2.12 融合细胞的筛选 | 第53-54页 |
| 2.13 杂交瘤细胞的亚克隆 | 第54-55页 |
| 2.14 杂交瘤细胞的克隆化 | 第55页 |
| 2.15 单克隆细胞株的扩大培养 | 第55页 |
| 2.16 杂交瘤细胞的冻存 | 第55-56页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第56-67页 |
| 3.1 免疫抗原的制备 | 第56页 |
| 3.2 血清效价的测定 | 第56-58页 |
| 3.3 筛选体系的建立 | 第58-63页 |
| 3.3.1 最佳HRP-IgG酶标二抗的确定 | 第58-59页 |
| 3.3.2 抗原最佳包被与抗血清浓度的确定 | 第59-61页 |
| 3.3.3 最佳封闭液的确定 | 第61页 |
| 3.3.4 一抗稀释液的确定 | 第61-62页 |
| 3.3.5 二抗稀释液的确定 | 第62-63页 |
| 3.4 小鼠血清的特异性检测 | 第63-64页 |
| 3.5 细胞融合及筛选 | 第64-67页 |
| 3.5.1 融合前细胞的培养及观察 | 第64-65页 |
| 3.5.2 杂交瘤细胞的培养与观察 | 第65页 |
| 3.5.3 细胞克隆化培养 | 第65-66页 |
| 3.5.4 杂交瘤细胞的筛选结果 | 第66-67页 |
| 4. 讨论 | 第67-68页 |
| 4.1 动物免疫 | 第67页 |
| 4.2 细胞融合注意事项 | 第67-68页 |
| 4.3 杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第68页 |
| 5. 小结 | 第68-69页 |
| 第四章 抗黄绿青霉素单克隆抗体的鉴定 | 第69-83页 |
| 1. 实验材料 | 第69-70页 |
| 1.1 主要试剂 | 第69-70页 |
| 1.2 实验动物与细胞 | 第70页 |
| 1.3 主要仪器 | 第70页 |
| 2. 实验方法 | 第70-75页 |
| 2.1 单克隆抗体亚类鉴定 | 第70页 |
| 2.2 杂交瘤细胞培养上清效价测定 | 第70-71页 |
| 2.3 细胞染色体分析 | 第71-72页 |
| 2.4 小鼠体内诱生抗体 | 第72页 |
| 2.5 单克隆抗体效价的测定 | 第72-73页 |
| 2.6 单克隆抗体的纯化 | 第73页 |
| 2.7 用SDS-PAGE检测纯化抗体纯度 | 第73-74页 |
| 2.8 抗体的亲和力测定 | 第74页 |
| 2.9 腹水纯化前后的单克隆抗体浓度的测定 | 第74页 |
| 2.10 单抗特异性测定 | 第74-75页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第75-81页 |
| 3.1 单克隆抗体的亚类鉴定 | 第75页 |
| 3.2 杂交瘤细胞培养上清效价测定 | 第75-76页 |
| 3.3 细胞染色体结果分析 | 第76-77页 |
| 3.4 单克隆抗体的纯化结果分析 | 第77-78页 |
| 3.5 腹水纯化前后蛋白浓度测定 | 第78页 |
| 3.6 腹水纯化前后的效价测定 | 第78-79页 |
| 3.7 抗体亲和力测定 | 第79-80页 |
| 3.8 单抗特异性测定 | 第80-81页 |
| 4. 讨论 | 第81-82页 |
| 4.1 单克隆抗体亚类 | 第81页 |
| 4.2 抗体纯化 | 第81-82页 |
| 5. 小结 | 第82-83页 |
| 第五章 黄绿青霉素ELISA检测方法的建立 | 第83-99页 |
| 1. 材料 | 第83页 |
| 2. 实验方法 | 第83-87页 |
| 2.1 HRP-IgG酶标二抗最佳浓度的确定 | 第83-84页 |
| 2.2 最佳包被抗原浓度与抗体工作浓度的确定 | 第84页 |
| 2.3 抗原包被条件的确定 | 第84页 |
| 2.4 最佳封闭液和封闭时间的选择 | 第84页 |
| 2.5 一抗作用方式的确定 | 第84-85页 |
| 2.6 二抗作用时间的确定 | 第85页 |
| 2.7 显色时间的确定 | 第85页 |
| 2.8 绘制竞争标准曲线 | 第85-86页 |
| 2.9 抗体稳定性的测定 | 第86页 |
| 2.10 玉米样品的前处理 | 第86页 |
| 2.11 精确度的测定 | 第86页 |
| 2.12 样品回收率的测定 | 第86-87页 |
| 2.13 实际样品的检测 | 第87页 |
| 3. 实验结果分析 | 第87-96页 |
| 3.1 HRP-IgG酶标二抗最佳稀释度的确定 | 第87-88页 |
| 3.2 包被原最佳包被浓度及抗体最佳工作浓度的确定 | 第88页 |
| 3.3 抗原包被条件的确定 | 第88-89页 |
| 3.4 最佳封闭液的选择 | 第89-90页 |
| 3.5 最佳封闭时间的选择 | 第90-91页 |
| 3.6 一抗竞争方式的确定 | 第91页 |
| 3.7 酶标二抗最佳作用时间的确定 | 第91-92页 |
| 3.8 TMB显色时间的确定 | 第92-93页 |
| 3.9 优化后的间接竞争ELISA参数 | 第93页 |
| 3.10 绘制标准曲线 | 第93-94页 |
| 3.11 抗体稳定性的测定 | 第94-95页 |
| 3.12 样品回收率及精密度的测定 | 第95-96页 |
| 3.13 实际样品的测定 | 第96页 |
| 4. 讨论 | 第96-97页 |
| 4.1 关于封闭 | 第96-97页 |
| 4.2 关于CIT的ELISA检测方法 | 第97页 |
| 4.3 关于标准曲线的拟合 | 第97页 |
| 5. 小结 | 第97-99页 |
| 全文总结 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-107页 |
| 附录 | 第107-110页 |
| 在读期间的科研成果 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
