| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-21页 |
| 1.1 核黄素的发现、理化性质、功能和用途 | 第9-10页 |
| 1.1.1 核黄素的发现与理化性质 | 第9页 |
| 1.1.2 核黄素的功能和用途 | 第9-10页 |
| 1.2 核黄素的生产工艺 | 第10-11页 |
| 1.2.1 植物体提取法 | 第10页 |
| 1.2.2 化学合成法 | 第10页 |
| 1.2.3 半微生物发酵合成法 | 第10-11页 |
| 1.2.4 微生物发酵法 | 第11页 |
| 1.3 核黄素的生物合成 | 第11-16页 |
| 1.3.1 大肠杆菌中核黄素生物合成途径 | 第11-13页 |
| 1.3.2 嘌呤生物合成途径的代谢调节机制 | 第13-14页 |
| 1.3.3 核黄素合成基因及其编码产物功能 | 第14-16页 |
| 1.4 基因工程技术在核黄素生产中的应用 | 第16-17页 |
| 1.5 Red 重组工程 | 第17-19页 |
| 1.5.1 Red 重组工程原理 | 第17-18页 |
| 1.5.2 无冗余碱基基因敲除和修饰研究概况 | 第18-19页 |
| 1.6 选题背景和研究内容 | 第19-21页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第21-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-26页 |
| 2.1.1 实验质粒与菌株 | 第21-22页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 培养基 | 第24-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-42页 |
| 2.2.1 引物设计和基因测序 | 第26页 |
| 2.2.2 PCR 反应体系 | 第26-28页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
| 2.2.4 DNA 片段的回收 | 第28-29页 |
| 2.2.5 DNA 片段的纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.6 DNA 片段的酶切 | 第30页 |
| 2.2.7 DNA 片段的连接 | 第30-31页 |
| 2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| 2.2.9 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第32-33页 |
| 2.2.10 大肠杆菌质粒 DNA 的提取(碱裂解法) | 第33-34页 |
| 2.2.11 大肠杆菌基因组 DNA 的提取 | 第34页 |
| 2.2.12 摇瓶发酵培养 | 第34-35页 |
| 2.2.13 菌株生长的测定 | 第35页 |
| 2.2.14 葡萄糖的测定 | 第35页 |
| 2.2.15 大肠杆菌发酵产物的测定 | 第35-36页 |
| 2.2.16 大肠杆菌 RNA 的反转录 | 第36-37页 |
| 2.2.17 RT-qPCR 反应 | 第37页 |
| 2.2.18 高氯酸法提取胞内代谢物[62] | 第37-38页 |
| 2.2.19 胞内核苷酸的测定[63] | 第38页 |
| 2.2.20 菌种的保藏 | 第38页 |
| 2.2.21 目的基因的无痕操作 | 第38-42页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第42-63页 |
| 3.1 大肠杆菌 MG1655 核黄素下游合成途径的代谢工程改造 | 第43-48页 |
| 3.1.1 枯草芽孢杆菌核黄素生物合成基因的克隆 | 第43-44页 |
| 3.1.2 大肠杆菌核黄素生物合成基因的克隆 | 第44-46页 |
| 3.1.3 ribB 基因的过表达 | 第46-48页 |
| 3.2 大肠杆菌中游合成途径(嘌呤生物合成途径)的代谢工程改造 | 第48-54页 |
| 3.2.1 ndk 基因的过表达 | 第48-49页 |
| 3.2.2 gmk 基因的过表达 | 第49-50页 |
| 3.2.3 purA 基因引入突变点 | 第50-51页 |
| 3.2.4 purF 基因的过表达 | 第51-53页 |
| 3.2.5 prs 基因的过表达 | 第53-54页 |
| 3.2.6 RF17S 菌株的构建 | 第54页 |
| 3.3 基因工程菌株的发酵结果 | 第54-61页 |
| 3.3.1 过表达核黄素生物合成基因生产核黄素 | 第54-56页 |
| 3.3.2 过表达 ribB 基因对大肠杆菌生产核黄素的影响 | 第56-57页 |
| 3.3.3 过表达 GTP 生物合成基因对大肠杆菌生产核黄素的影响 | 第57-58页 |
| 3.3.4 在 purA 基因中引入突变点对大肠杆菌生产核黄素的影响 | 第58-59页 |
| 3.3.5 过表达突变的 purF 和 prs 基因对大肠杆菌生产核黄素的影响 | 第59-61页 |
| 3.4 ribB、ndk、gmk、purF 和 prs 的转录表征 | 第61页 |
| 3.5 细胞内嘌呤核苷酸和乙酸的测定 | 第61-63页 |
| 第四章 结论与展望 | 第63-65页 |
| 4.1 结论 | 第63-64页 |
| 4.2 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
