| 第一部分 N-乙酰半胱氨酸萝卜硫素通过Hsp70介导的微管断裂抑制自噬诱导非小细胞肺癌细胞凋亡 | 第8-89页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-15页 |
| 材料与方法 | 第15-40页 |
| 1．主要仪器 | 第15-16页 |
| 2．主要试剂 | 第16-19页 |
| 3．实验室常用溶液 | 第19-22页 |
| 3.1 10×D-Hank's液 | 第19页 |
| 3.2 0.25%胰酶消化液 | 第19页 |
| 3.3 10×PBS缓冲液 | 第19-20页 |
| 3.4 1×PBS缓冲液 | 第20页 |
| 3.5 1.5 M Tris-HCl（pH 8.8） | 第20页 |
| 3.6 0.5 M Tris-HCl（pH 6.8） | 第20页 |
| 3.7 10%过硫酸铵（APS） | 第20页 |
| 3.8 10%十二烷基磺酸钠（SDS） | 第20页 |
| 3.9 20×TBS缓冲液 | 第20-21页 |
| 3.10 TBST缓冲液 | 第21页 |
| 3.11 5×电泳缓冲液 | 第21页 |
| 3.12 10×转膜缓冲液 | 第21页 |
| 3.13 0.1 M PB缓冲液 | 第21页 |
| 3.14 3%戊二醛 | 第21-22页 |
| 3.15 1M氢氧化钠 | 第22页 |
| 3.16 1%锇酸固定液 | 第22页 |
| 3.17 醋酸铀染色液 | 第22页 |
| 3.18 硝酸铅染色液 | 第22页 |
| 4．细胞培养 | 第22-25页 |
| 4.1 细胞复苏 | 第23页 |
| 4.2 细胞传代 | 第23-24页 |
| 4.3 细胞冻存 | 第24-25页 |
| 5．细胞形态观察 | 第25页 |
| 6．细胞增殖活性检测 | 第25-26页 |
| 7．si RNA的合成及转染 | 第26-27页 |
| 8．流式细胞术检测凋亡 | 第27-28页 |
| 9．蛋白的提取与定量 | 第28-30页 |
| 10．可溶性 α-tubulin蛋白与非可溶性 α-tubulin蛋白的提取 | 第30-31页 |
| 11．免疫共沉淀（co-immunoprecipitation, Co-IP） | 第31-33页 |
| 12．Western blot | 第33-34页 |
| 13．激光扫描共聚焦显微镜分析 | 第34-35页 |
| 14．透射电子显微镜（transmission electron microscope, TEM） | 第35-37页 |
| 15．免疫组化（immunohistochemistry, IHC） | 第37-39页 |
| 16．数据处理和统计学检验 | 第39-40页 |
| 结果 | 第40-74页 |
| 1．SFN-NAC抑制NSCLC A549和SK-1 细胞增殖并诱导凋亡 | 第40-44页 |
| 1.1 SFN-NAC诱导NSCLC细胞形态改变 | 第40-41页 |
| 1.2 SFN-NAC抑制NSCLC细胞的增殖 | 第41-42页 |
| 1.3 SFN-NAC诱导NSCLC细胞凋亡 | 第42-44页 |
| 2．SFN-NAC通过活化ERK1/2 上调Hsp70的表达 | 第44-51页 |
| 2.1 SFN-NAC上调NSCLC细胞ERK1/2 的磷酸化水平 | 第44-45页 |
| 2.2 SFN-NAC活化ERK1/2 上调NSCLC细胞Hsp70的表达 | 第45-47页 |
| 2.3 Hsp70在肺癌组织中高表达 | 第47-51页 |
| 3．SFN-NAC下调 ɑ-tubulin的表达诱导微管断裂 | 第51-58页 |
| 3.1 SFN-NAC下调NSCLC细胞 ɑ-tubulin表达 | 第51-52页 |
| 3.2 SFN-NAC下调可溶性以及非可溶性 ɑ-tubulin表达 | 第52-53页 |
| 3.3 SFN-NAC诱导NSCLC细胞微管断裂 | 第53-54页 |
| 3.4 α-tubulin在肺癌组织中高表达 | 第54-58页 |
| 4．SFN-NAC通过活化ERK1/2 下调NSCLC细胞Stathmin-1 表达 | 第58-60页 |
| 4.1 SFN-NAC下调NSCLC细胞Stathmin-1 的表达 | 第58-59页 |
| 4.2 抑制ERK1/2 活化逆转SFN-NAC诱导的Stathmin-1 表达下调 | 第59-60页 |
| 5．Hsp70抑制SFN-NAC诱导的 α-tubulin和Stathmin-1 表达下调 | 第60-62页 |
| 5.1 敲低Hsp70增强SFN-NAC诱导的 α-tubulin表达下降 | 第60-61页 |
| 5.2 敲低Hsp70增强SFN-NAC诱导的Stathmin-1 表达下调 | 第61-62页 |
| 6．SFN-NAC增强Hsp70与 α-tubulin的相互作用 | 第62-65页 |
| 6.1 SFN-NAC增加NSCLC细胞Hsp70与 α-tubulin的结合 | 第62-63页 |
| 6.2 SFN-NAC增强NSCLC细胞Hsp70与 α-tubulin的共定位 | 第63-65页 |
| 7．SFN-NAC抑制NSCLC细胞自噬 | 第65-69页 |
| 7.1 SFN-NAC引起NSCLC细胞产生自噬体以及自噬溶酶体 | 第65-66页 |
| 7.2 SFN-NAC引起NSCLC细胞LC3点状聚集增多 | 第66-67页 |
| 7.3 SFN-NAC上调NSCLC细胞LC3 II/LC3 I | 第67-69页 |
| 8．抑制自噬增加SFN-NAC诱导的NSCLC细胞凋亡 | 第69-70页 |
| 9．Hsp70调节NSCLC细胞自噬抵抗细胞凋亡 | 第70-74页 |
| 9.1 敲低Hsp70增加SFN-NAC诱导的细胞凋亡 | 第70-72页 |
| 9.2 敲低Hsp70下调SFN-NAC上调的LC3 II/LC3 I | 第72-74页 |
| 讨论 | 第74-79页 |
| 小结一 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-89页 |
| 第二部分 敲低Tau增强N-乙酰半胱氨酸萝卜硫素对非小细胞肺癌细胞的侵润抑制 | 第89-131页 |
| 中文摘要 | 第89-91页 |
| 英文摘要 | 第91-93页 |
| 前言 | 第93-96页 |
| 材料与方法 | 第96-106页 |
| 1．主要仪器 | 第96-97页 |
| 2．主要试剂 | 第97-99页 |
| 3．实验室常用溶液 | 第99页 |
| 4．细胞培养 | 第99-100页 |
| 4.1 细胞复苏 | 第99页 |
| 4.2 细胞传代 | 第99页 |
| 4.3 细胞冻存 | 第99-100页 |
| 5．细胞增殖活性检测 | 第100页 |
| 6．细胞划痕实验 | 第100-101页 |
| 7．Transwell细胞体外侵润实验 | 第101-102页 |
| 8．si RNA的合成及转染 | 第102-103页 |
| 9．蛋白的提取与定量 | 第103页 |
| 10．Western blot | 第103-104页 |
| 11．激光扫描共焦显微镜 | 第104页 |
| 12．透射电子显微镜 | 第104-105页 |
| 13．数据处理和统计学检验 | 第105-106页 |
| 结果 | 第106-120页 |
| 1．SFN-NAC抑制NSCLC细胞增殖活性、迁移和侵润 | 第106-108页 |
| 1.1 SFN-NAC抑制NSCLC细胞增殖活性 | 第106页 |
| 1.2 SFN-NAC抑制NSCLC细胞迁移 | 第106-107页 |
| 1.3 SFN-NAC抑制NSCLC细胞侵润 | 第107-108页 |
| 2．SFN-NAC通过下调 ɑ-tubulin诱导微管紊乱 | 第108-110页 |
| 2.1 SFN-NAC下调NSCLC细胞 ɑ-tubulin的表达 | 第108-109页 |
| 2.2 SFN-NAC紊乱NSCLC细胞的微管结构 | 第109-110页 |
| 3．SFN-NAC引起细胞产生自噬体以及自噬溶酶体 | 第110-113页 |
| 3.1 SFN-NAC引起细胞产生自噬体以及自噬溶酶体 | 第110-111页 |
| 3.2 SFN-NAC增加NSCLC细胞LC3的点状聚集 | 第111-112页 |
| 3.3 SFN-NAC上调LC3 II/LC3 I | 第112-113页 |
| 4．自噬抑制剂增强SFN-NAC对细胞迁移和侵润的抑制 | 第113-115页 |
| 4.1 自噬抑制剂增强SFN-NAC对NSCLC细胞迁移的抑制 | 第113-114页 |
| 4.2 自噬抑制剂增强SFN-NAC对NSCLC细胞侵润的抑制 | 第114-115页 |
| 5．敲低Tau抑制SFN-NAC上调的LC3 II/LC3 I | 第115-116页 |
| 5.1 SFN-NAC上调NSCLC细胞Tau的表达 | 第115页 |
| 5.2 敲低Tau降低SFN-NAC上调的LC3 II/LC3 I | 第115-116页 |
| 6．敲低Tau增强SFN-NAC对细胞迁移和侵润的抑制 | 第116-120页 |
| 6.1 敲低Tau增强SFN-NAC对NSCLC细胞迁移的抑制 | 第116-117页 |
| 6.2 敲低Tau增强SFN-NAC对NSCLC细胞侵润的抑制作用 | 第117-120页 |
| 讨论 | 第120-123页 |
| 小结二 | 第123-124页 |
| 参考文献 | 第124-131页 |
| 结论 | 第131-132页 |
| 文献综述 | 第132-159页 |
| 参考文献 | 第144-159页 |
| 附录 | 第159-163页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第163-164页 |
| 致谢 | 第164-165页 |
| 个人简历 | 第165页 |
