符号说明 | 第4-8页 |
中文摘要 | 第8-10页 |
Abstract | 第10-11页 |
1 前言 | 第12-20页 |
1.1 高温和干旱对植物的危害 | 第12-16页 |
1.1.1 高温的危害 | 第12-14页 |
1.1.2 干旱的危害 | 第14-15页 |
1.1.3 高温和干旱的互作 | 第15-16页 |
1.2 植物对高温及干旱的适应机制 | 第16-18页 |
1.2.1 渗透调节 | 第16-17页 |
1.2.2 活性氧清除 | 第17-18页 |
1.2.3 蛋白质量控制 | 第18页 |
1.2.4 植物激素调控 | 第18页 |
1.3 本研究的目的和意义 | 第18-20页 |
2 实验材料与方法 | 第20-34页 |
2.1 实验材料 | 第20-21页 |
2.2 实验方法 | 第21-34页 |
2.2.1 游离脯氨酸的测定 | 第21页 |
2.2.2 Trizol法提玉米总RNA | 第21页 |
2.2.3 高通量测序分析 | 第21-22页 |
2.2.3.1 试验材料处理 | 第21页 |
2.2.3.2 基因表达谱测序 | 第21-22页 |
2.2.3.3 基因功能注释 | 第22页 |
2.2.4 基因序列分析 | 第22-23页 |
2.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第23页 |
2.2.6 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第23页 |
2.2.7 基因克隆载体的构建 | 第23-25页 |
2.2.7.1 RT-PCR扩增 | 第23-24页 |
2.2.7.2 RT-PCR反应程序 | 第24页 |
2.2.7.3 扩增产物的电泳回收 | 第24-25页 |
2.2.7.4 目的基因与克隆载体的连接 | 第25页 |
2.2.7.5 重组子的验证 | 第25页 |
2.2.8 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第25-26页 |
2.2.9 植物重组表达载体的构建及其鉴定 | 第26-27页 |
2.2.10 农杆菌感受态细胞的制备 | 第27页 |
2.2.11 质粒向农杆菌转化(冻融法) | 第27页 |
2.2.12 农杆菌介导的花序浸染法转化拟南芥 | 第27-28页 |
2.2.13 CTAB法提取基因组DNA | 第28页 |
2.2.14 洋葱表皮GFP亚细胞定位 | 第28-30页 |
2.2.14.1 GFP融合植物表达载体的构建 | 第28-29页 |
2.2.14.2 基因枪微弹的准备 | 第29页 |
2.2.14.3 基因枪转化 | 第29页 |
2.2.14.4 荧光观察 | 第29-30页 |
2.2.15 DIG northern杂交 | 第30-34页 |
2.2.15.1 试验材料处理 | 第30页 |
2.2.15.2 在含有甲醛的凝胶上进行RNA电泳 | 第30页 |
2.2.15.3 RNA转膜和固定 | 第30-31页 |
2.2.15.4 探针制备 | 第31页 |
2.2.15.5 DIG标记有效性检测 | 第31-33页 |
2.2.15.6 杂交 | 第33-34页 |
3 结果与分析 | 第34-58页 |
3.1 玉米响应高温、干旱及复合胁迫的表达谱分析 | 第34-48页 |
3.1.1 测序质量分析 | 第34-35页 |
3.1.2 Unique read拷贝数和表达量的分布 | 第35页 |
3.1.3 差异基因表达分布 | 第35-38页 |
3.1.4 差异表达基因的GO功能分类和显著性富集分析 | 第38-40页 |
3.1.5 差异表达基因的KEGG代谢分析 | 第40-44页 |
3.1.6 胁迫诱导高水平表达基因的功能分析 | 第44-48页 |
3.2 小分子热激蛋白ZmsHSPl7.7克隆及功能鉴定 | 第48-58页 |
3.2.1 玉米ZmsHSP17.7基因的克隆 | 第48-50页 |
3.2.2 ZmsHSP17.7序列的相似性和进化分析 | 第50-52页 |
3.2.3 ZmsHSP17.7蛋白的亚细胞定位分析 | 第52页 |
3.2.4 ZmsHSP17.7基因的表达特性分析 | 第52-53页 |
3.2.5 异源超表达ZmsHSP17.7基因拟南芥的获得 | 第53-55页 |
3.2.6 超表达ZmsHSP17.7基因提高转基因植株抗热性 | 第55-56页 |
3.2.7 超表达ZmsHSP17.7基因提高转基因植株抗旱性 | 第56页 |
3.2.8 超表达ZmsHSP17.7基因提高转基因植株抗盐性 | 第56-58页 |
4 讨论 | 第58-62页 |
5 结论 | 第62-63页 |
参考文献 | 第63-71页 |
致谢 | 第71-72页 |
攻读学位期间发表论文情况 | 第72页 |