| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1 PIWI的研究进展 | 第11-14页 |
| 1.1 Argonaute家族 | 第11页 |
| 1.2 PIWI家族的发展 | 第11-12页 |
| 1.3 PIWI的主要生功能 | 第12-14页 |
| 2 精子的发生 | 第14页 |
| 3 真核生物基因的表达调控 | 第14-17页 |
| 3.1 真核生物转录水平的调控 | 第15-17页 |
| 4 启动子活性的研究 | 第17-18页 |
| 5 真核生物转录因子的研究方法 | 第18-21页 |
| 5.1 DNA迁移率变动试验 | 第18-19页 |
| 5.2 DNA足迹试验 | 第19-20页 |
| 5.3 染色质免疫沉淀 | 第20页 |
| 5.4 染色质免疫沉淀-DNA基因芯片 | 第20-21页 |
| 6 细胞周期同步化 | 第21-22页 |
| 7 本文研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 鸡Piwill启动子区转录调控的初步鉴定 | 第23-42页 |
| 1 实验材料 | 第23-24页 |
| 1.1 实验动物 | 第23页 |
| 1.2 菌株和载体 | 第23页 |
| 1.3 细胞株 | 第23页 |
| 1.4 主要仪器 | 第23-24页 |
| 1.5 主要试剂 | 第24页 |
| 2 实验方法 | 第24-32页 |
| 2.1 鸡Piwill启动子区系列缺失片段的扩增 | 第24-25页 |
| 2.2 PCR反应体系及程序 | 第25-26页 |
| 2.3 Piwill启动子克隆载体的构建 | 第26页 |
| 2.4 质粒DNA的小量提取 | 第26-27页 |
| 2.5 重组质粒的双酶切及回收 | 第27-28页 |
| 2.6 连接反应 | 第28-29页 |
| 2.7 重组质粒的转化和鉴定 | 第29页 |
| 2.8 细胞的培养 | 第29-30页 |
| 2.9 细胞瞬时转染 | 第30页 |
| 2.10 双荧光素酶活性检测 | 第30-31页 |
| 2.11 定点突变表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 3 实验结果 | 第32-40页 |
| 3.1 鸡Piwill启动子区系列缺失片段的PCR扩增鉴定结果 | 第32页 |
| 3.2 鸡Piwill启动子区系列缺失表达载体的酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 3.3 定点突变重组质粒的构建 | 第33-35页 |
| 3.4 转录因子预测 | 第35-40页 |
| 3.5 突变重组质粒双荧光素酶活性检测 | 第40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 鸡睾丸组织中Piwill启动区转录因子的鉴定 | 第42-51页 |
| 0 引言 | 第42页 |
| 1 实验材料 | 第42-43页 |
| 1.1 实验动物 | 第42页 |
| 1.2 主要仪器 | 第42页 |
| 1.3 主要试剂 | 第42-43页 |
| 2 实验方法 | 第43-47页 |
| 2.1 核蛋白的提取 | 第43页 |
| 2.2 BCA法核蛋白定量 | 第43-44页 |
| 2.3 探针的制备 | 第44页 |
| 2.4 凝胶迁移实验 | 第44-47页 |
| 3 实验结果 | 第47-49页 |
| 3.1 提取睾丸组织核蛋白浓度 | 第47-48页 |
| 3.2 睾丸组织EMSA凝胶迁移结果 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 不同生精细胞中NF-Y的调控研究 | 第51-59页 |
| 1 引言 | 第51页 |
| 2 实验材料 | 第51-52页 |
| 2.1 实验动物 | 第51页 |
| 2.2 主要仪器 | 第51页 |
| 2.3 主要试剂 | 第51页 |
| 2.4 因子培养基的制备 | 第51-52页 |
| 3 实验方法 | 第52-54页 |
| 3.1 原始生殖细胞(PGCs)的分离 | 第52页 |
| 3.2 精原干细胞(SSCs)的分离 | 第52页 |
| 3.3 精原细胞的分离及纯化 | 第52-53页 |
| 3.4 秋水仙素处理精原细胞 | 第53页 |
| 3.5 核蛋白的提取 | 第53页 |
| 3.6 BCA法核蛋白定量 | 第53-54页 |
| 3.7 EMSA实验 | 第54页 |
| 4 实验结果 | 第54-57页 |
| 4.1 样品核蛋白浓度 | 第54-55页 |
| 4.2 不同细胞EMSA实验结果 | 第55-57页 |
| 5 讨论 | 第57-59页 |
| 全文结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
