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胰岛素受体底物1和2敲低对猪肝脏细胞糖脂代谢的影响

摘要第8-10页
Abstract第10-11页
1 前言第12-21页
    1.1 糖尿病研究概述第12页
        1.1.1 1型糖尿病概述第12页
        1.1.2 2型糖尿病概述第12页
    1.2 2型糖尿病发病机制第12-15页
        1.2.1 胰岛素信号通路第13页
        1.2.2 IRSs基因功能与2型糖尿病第13-15页
    1.3 2型糖尿病动物疾病模型第15-19页
        1.3.1 自发型2型糖尿病动物模型第15-16页
        1.3.2 食物诱导型2型糖尿病动物模型第16页
        1.3.3 化学诱导型2型糖尿病动物模型第16-17页
        1.3.4 基因敲除型2型糖尿病动物模型第17-19页
    1.4 2型糖尿病猪模型第19-21页
        1.4.1 诱导型2型糖尿病猪模型第19-20页
        1.4.2 基因修饰型2型糖尿病猪模型第20-21页
2 材料与方法第21-31页
    2.1 实验材料第21-22页
        2.1.1 组织材料第21页
        2.1.2 主要试剂第21页
        2.1.3 主要仪器第21-22页
        2.1.4 试剂的配制第22页
    2.2 实验方法第22-31页
        2.2.1 动物组织DNA提取第22-23页
        2.2.2 提取RNA及反转录第23-24页
        2.2.3 猪IRS1基因的克隆第24-27页
        2.2.4 猪IRS2基因3'UTR区域的克隆第27-28页
        2.2.5 pGenesil-shIRS1/shIRS2干扰载体的构建第28-29页
        2.2.6 猪肝脏原代细胞的培养第29页
        2.2.7 Real-time PCR检测糖代谢与脂类相关基因的表达第29-30页
        2.2.8 实验数据分析第30-31页
3 结果与分析第31-41页
    3.1 猪IRS1基因的克隆及有效干扰片段的筛选第31-34页
        3.1.1 重叠PCR克隆猪IRS1基因第31-32页
        3.1.2 猪IRS1基因结构第32页
        3.1.3 猪IRS1基因在各组织中表达第32页
        3.1.4 pGenesil-sh1RS1干扰载体的构建第32-33页
        3.1.5 猪IRS1基因有效干扰片段的筛选第33-34页
    3.2 猪IRS2基因3'UTR序列的克隆以及有效干扰片段的筛选第34-37页
        3.2.1 猪IRS2基因保守序列的扩增第34-35页
        3.2.2 3’RACE扩增猪IRS2基因部分3’UTR序列第35-36页
        3.2.3 猪IRS2基因在各组织中表达第36页
        3.2.4 pGenesil-shIRS2干扰载体的构建第36页
        3.2.5 猪IRS2基因有效干扰片段的筛选第36-37页
    3.3 pGenesil-shIRS1/shIRS2干扰载体的构建第37-39页
        3.3.1 hU6启动子的扩增第37页
        3.3.2 构建pGenesil-shIRS1/shIRS2干扰载体第37-39页
    3.4 猪肝脏细胞中同时敲低IRS1和IRS2基因对糖代谢的影响第39页
    3.5 猪肝脏细胞中敲低IRS1和IRS2基因对胆固醇代谢的影响第39-41页
4 讨论第41-44页
    4.1 猪IRS1和IRS2基因的克隆和表达第41页
    4.2 RNAi对猪IRS1和IRS2基因表达的敲低第41-42页
    4.3 胰岛素受体底物的敲低对猪肝脏细胞代谢的影响第42-44页
        4.3.1 对葡糖代谢的影响第42页
        4.3.2 对脂类代谢的影响第42-44页
5 结论第44-45页
致谢第45-46页
参考文献第46-52页
攻读硕士学位期间发表的学术论文第52页

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