| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 糖尿病研究概述 | 第12页 |
| 1.1.1 1型糖尿病概述 | 第12页 |
| 1.1.2 2型糖尿病概述 | 第12页 |
| 1.2 2型糖尿病发病机制 | 第12-15页 |
| 1.2.1 胰岛素信号通路 | 第13页 |
| 1.2.2 IRSs基因功能与2型糖尿病 | 第13-15页 |
| 1.3 2型糖尿病动物疾病模型 | 第15-19页 |
| 1.3.1 自发型2型糖尿病动物模型 | 第15-16页 |
| 1.3.2 食物诱导型2型糖尿病动物模型 | 第16页 |
| 1.3.3 化学诱导型2型糖尿病动物模型 | 第16-17页 |
| 1.3.4 基因敲除型2型糖尿病动物模型 | 第17-19页 |
| 1.4 2型糖尿病猪模型 | 第19-21页 |
| 1.4.1 诱导型2型糖尿病猪模型 | 第19-20页 |
| 1.4.2 基因修饰型2型糖尿病猪模型 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 组织材料 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.4 试剂的配制 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-31页 |
| 2.2.1 动物组织DNA提取 | 第22-23页 |
| 2.2.2 提取RNA及反转录 | 第23-24页 |
| 2.2.3 猪IRS1基因的克隆 | 第24-27页 |
| 2.2.4 猪IRS2基因3'UTR区域的克隆 | 第27-28页 |
| 2.2.5 pGenesil-shIRS1/shIRS2干扰载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.6 猪肝脏原代细胞的培养 | 第29页 |
| 2.2.7 Real-time PCR检测糖代谢与脂类相关基因的表达 | 第29-30页 |
| 2.2.8 实验数据分析 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-41页 |
| 3.1 猪IRS1基因的克隆及有效干扰片段的筛选 | 第31-34页 |
| 3.1.1 重叠PCR克隆猪IRS1基因 | 第31-32页 |
| 3.1.2 猪IRS1基因结构 | 第32页 |
| 3.1.3 猪IRS1基因在各组织中表达 | 第32页 |
| 3.1.4 pGenesil-sh1RS1干扰载体的构建 | 第32-33页 |
| 3.1.5 猪IRS1基因有效干扰片段的筛选 | 第33-34页 |
| 3.2 猪IRS2基因3'UTR序列的克隆以及有效干扰片段的筛选 | 第34-37页 |
| 3.2.1 猪IRS2基因保守序列的扩增 | 第34-35页 |
| 3.2.2 3’RACE扩增猪IRS2基因部分3’UTR序列 | 第35-36页 |
| 3.2.3 猪IRS2基因在各组织中表达 | 第36页 |
| 3.2.4 pGenesil-shIRS2干扰载体的构建 | 第36页 |
| 3.2.5 猪IRS2基因有效干扰片段的筛选 | 第36-37页 |
| 3.3 pGenesil-shIRS1/shIRS2干扰载体的构建 | 第37-39页 |
| 3.3.1 hU6启动子的扩增 | 第37页 |
| 3.3.2 构建pGenesil-shIRS1/shIRS2干扰载体 | 第37-39页 |
| 3.4 猪肝脏细胞中同时敲低IRS1和IRS2基因对糖代谢的影响 | 第39页 |
| 3.5 猪肝脏细胞中敲低IRS1和IRS2基因对胆固醇代谢的影响 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-44页 |
| 4.1 猪IRS1和IRS2基因的克隆和表达 | 第41页 |
| 4.2 RNAi对猪IRS1和IRS2基因表达的敲低 | 第41-42页 |
| 4.3 胰岛素受体底物的敲低对猪肝脏细胞代谢的影响 | 第42-44页 |
| 4.3.1 对葡糖代谢的影响 | 第42页 |
| 4.3.2 对脂类代谢的影响 | 第42-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第52页 |
