| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-19页 |
| 1.1 前言 | 第13页 |
| 1.2 半胱氨酸蛋白酶抑制剂的研究进展 | 第13-19页 |
| 1.2.1 半胱氨酸蛋白酶抑制剂的分类及结构特征 | 第13-15页 |
| 1.2.2 半胱氨酸蛋白酶抑制剂的生物学功能 | 第15-16页 |
| 1.2.3 半胱氨酸蛋白酶抑制剂的研究进展 | 第16-19页 |
| 第2章 家蝇MdCYA，MdCYB1 和MdCYB2 基因的克隆与序列分析 | 第19-30页 |
| 2.1 主要实验材料 | 第19页 |
| 2.1.1 昆虫来源 | 第19页 |
| 2.1.2 主要实验仪器与试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 载体和菌种 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-20页 |
| 2.2.1 总RNA 提取和反转录 | 第19-20页 |
| 2.2.2 家蝇cystatin 基因的克隆 | 第20页 |
| 2.2.3 生物信息学分析 | 第20页 |
| 2.3 结果 | 第20-28页 |
| 2.3.1 家蝇cystatins cDNA 的克隆与序列分析 | 第20-25页 |
| 2.3.2 蛋白功能结构域分析 | 第25-26页 |
| 2.3.3 蛋白质二级结构分析 | 第26-27页 |
| 2.3.4 蛋白质三级结构分析 | 第27-28页 |
| 2.4 讨论 | 第28-30页 |
| 第3章 家蝇MdCYA，MdCYB1 和MdCYB2 基因的表达水平与功能分析 | 第30-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-32页 |
| 3.2.1 总RNA 提取和反转录 | 第30-31页 |
| 3.2.1.1 菌刺激家蝇幼虫总RNA 提取和反转录 | 第30-31页 |
| 3.2.1.2 家蝇不同发育阶段总RNA 提取和反转录 | 第31页 |
| 3.2.1.3 家蝇不同组织总RNA 提取和反转录 | 第31页 |
| 3.2.1.4 家蝇在滞育条件下总RNA 提取和反转录 | 第31页 |
| 3.2.1.5 家蝇不同营养条件总RNA 提取和反转录 | 第31页 |
| 3.2.2 家蝇MdCYA，MdCYB1 和MdCYB2 基因的荧光定量分析 | 第31-32页 |
| 3.3 结果 | 第32-37页 |
| 3.3.1 家蝇MdCYA，MdCYB1 和MdCYB2 基因经菌刺激后表达水平分析 | 第32-34页 |
| 3.3.2 家蝇MdCYA，MdCYB1 和MdCYB2 基因不同发育阶段表达水平分析 | 第34-35页 |
| 3.3.3 家蝇MdCYA，MdCYB1 和MdCYB2 基因在不同组织中表达水平分析 | 第35-36页 |
| 3.3.4 家蝇MdCYA，MdCYB1 和MdCYB2 基因在滞育条件下表达水平分析 | 第36-37页 |
| 3.3.5 家蝇MdCYA，MdCYB1 和MdCYB2 基因在不同营养条件下表达水平分析 | 第37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-39页 |
| 第4章 家蝇MdCYA，MdCYB1 和MdCYB2 基因的重组表达及活性检测 | 第39-49页 |
| 4.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 4.1.1 质粒、菌种 | 第39页 |
| 4.1.2 主要实验仪器与试剂 | 第39-40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40-43页 |
| 4.2.1 pET-176-rMdCYA，pET-176-rMdCYB1 和pET-176-rMdCYB2 原核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 4.2.2 家蝇MdCYA，MdCYB1 和MdCYB2 重组蛋白的诱导表达 | 第41页 |
| 4.2.3 重组蛋白的可溶性分析及纯化 | 第41-42页 |
| 4.2.3.1 纯化蛋白PBS 溶液配制 | 第41页 |
| 4.2.3.2 重组蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| 4.2.4 重组蛋白的活性检测 | 第42-43页 |
| 4.2.4.1 酪蛋白平板法活性检测 | 第42页 |
| 4.2.4.2 抑制曲线法活性检测 | 第42-43页 |
| 4.3 实验结果 | 第43-47页 |
| 4.3.1 重组蛋白的表达及纯化 | 第43-44页 |
| 4.3.2 重组蛋白的浓度测定 | 第44页 |
| 4.3.3 重组蛋白的活性检测 | 第44-47页 |
| 4.3.3.1 酪蛋白平板法活性检测 | 第44-45页 |
| 4.3.3.2 抑制曲线法活性检测 | 第45-47页 |
| 4.4 讨论 | 第47-49页 |
| 第5章 家蝇MdCYA 的抗体制备及免疫组化分析 | 第49-53页 |
| 5.1 实验材料 | 第49页 |
| 5.2 实验方法 | 第49-50页 |
| 5.2.1 MdCYA 抗血清的制备 | 第49页 |
| 5.2.2 Western Blot 鉴定 | 第49-50页 |
| 5.2.3 MdCYA 免疫组化分析 | 第50页 |
| 5.3 实验结果 | 第50-52页 |
| 5.3.1 Western Blot 鉴定 | 第50-51页 |
| 5.3.2 MdCYA 免疫组化分析 | 第51-52页 |
| 5.4 讨论 | 第52-53页 |
| 第6章 家蝇MdCYA 和MdCYB1 基因干扰与功能研究 | 第53-58页 |
| 6.1 实验材料 | 第53页 |
| 6.2 实验方法 | 第53-54页 |
| 6.2.1 基因克隆与干扰载体构建 | 第53-54页 |
| 6.2.2 dsRNA 的诱导表达 | 第54页 |
| 6.2.3 dsRNA 投喂 | 第54页 |
| 6.3 实验结果 | 第54-56页 |
| 6.3.1 干扰载体的构建与dsRNA 的诱导 | 第54-55页 |
| 6.3.2 dsRNA 投喂 | 第55-56页 |
| 6.4 讨论 | 第56-58页 |
| 总结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 | 第67页 |
