| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 一、前言 | 第10-29页 |
| 1.1 金黄色葡萄球菌的耐药性问题 | 第10-11页 |
| 1.2 新型抗菌剂—溶葡萄球菌酶 | 第11-27页 |
| 1.2.1 溶葡萄球菌酶的发现 | 第11页 |
| 1.2.2 溶葡萄球菌酶的理化性质 | 第11-12页 |
| 1.2.3 溶葡萄球菌酶的溶菌机制 | 第12-13页 |
| 1.2.4 溶葡萄球菌酶的克隆与表达 | 第13-15页 |
| 1.2.5 溶葡萄球菌酶的体外抗菌活性研究 | 第15-16页 |
| 1.2.6 溶葡萄球菌酶的实验动物体内药效学研究 | 第16-20页 |
| 1.2.7 溶葡萄球菌酶的临床应用研究 | 第20-22页 |
| 1.2.8 金葡菌对溶葡萄球菌酶的耐药性研究 | 第22-23页 |
| 1.2.9 溶葡萄球菌酶的药代动力学研究 | 第23页 |
| 1.2.10 溶葡萄球菌酶的安全性研究 | 第23-25页 |
| 1.2.11 溶葡萄球菌酶的结构研究 | 第25-27页 |
| 1.3 论文的立题依据 | 第27-29页 |
| 二、材料与方法 | 第29-36页 |
| 2.1 材料 | 第29页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第29页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 2.1.3 引物和DNA序列测定 | 第29页 |
| 2.1.4 培养基和抗生素 | 第29页 |
| 2.2 方法 | 第29-36页 |
| 2.2.1 生物信息学分析软件 | 第29-30页 |
| 2.2.2 工程菌的构建与表达 | 第30-31页 |
| 2.2.3 重组蛋白的纯化 | 第31页 |
| 2.2.4 重组蛋白的鉴定 | 第31页 |
| 2.2.5 圆二色性分析 | 第31页 |
| 2.2.6 比浊法测定溶菌活性 | 第31-32页 |
| 2.2.7 与金葡菌亲和力检测 | 第32页 |
| 2.2.8 同源模建 | 第32页 |
| 2.2.9 分子对接 | 第32页 |
| 2.2.10 蛋白氢氘交换反应 | 第32-33页 |
| 2.2.11 胃蛋白酶酶解方法 | 第33页 |
| 2.2.12 质谱检测酶解肽段 | 第33页 |
| 2.2.13 酶解肽段鉴定 | 第33页 |
| 2.2.14 肽段氢氘交换率分析 | 第33-34页 |
| 2.2.15 突变体的构建、表达和纯化 | 第34-35页 |
| 2.2.16 双半胱氨酸突变体的交联分析 | 第35-36页 |
| 三、结果 | 第36-75页 |
| 3.1 溶葡萄球菌酶的生物信息学分析 | 第36-39页 |
| 3.1.1 溶葡萄球菌酶的一级序列分析 | 第36-38页 |
| 3.1.2 溶葡萄球菌酶的二级结构分析 | 第38-39页 |
| 3.1.3 溶葡萄球菌酶的高级结构检索 | 第39页 |
| 3.2 溶葡萄球菌酶及其两个结构域的克隆、表达、纯化与活性研究 | 第39-50页 |
| 3.2.1 重组蛋白的工程菌构建和表达 | 第39-40页 |
| 3.2.2 重组蛋白的纯化和鉴定 | 第40-44页 |
| 3.2.3 重组溶葡萄球菌酶的圆二色性分析 | 第44-46页 |
| 3.2.4 重组溶葡萄球菌酶及其催化区对金葡菌的溶活性 | 第46-48页 |
| 3.2.5 重组溶葡萄球菌酶及其结合区与金葡菌的亲和力分析 | 第48-50页 |
| 3.3 溶葡萄球菌酶催化区和结合区的结构模建以及结构域之间的分子对接 | 第50-53页 |
| 3.3.3 溶葡萄球菌酶催化区和结合区的结构模建 | 第50-51页 |
| 3.3.4 分子对接预测溶葡萄球菌酶的高级结构 | 第51-53页 |
| 3.4 氢氘交换质谱法鉴定溶葡萄球菌酶结构域之间相互作用界面上的肽段 | 第53-69页 |
| 3.4.1 溶葡萄球菌酶经胃蛋白酶酶解后的肽段鉴定 | 第56-59页 |
| 3.4.2 MALDI-TOF MS检测酶解肽段的覆盖率 | 第59-63页 |
| 3.4.3 建立MALDI-TOF MS检测氘代肽段的方法 | 第63-66页 |
| 3.4.4 溶葡萄球菌酶和它的两个结构域之间的氢氘交换率比较 | 第66-69页 |
| 3.5 位点特异二硫键交联验证结构域之间的相互作用界面 | 第69-75页 |
| 3.5.4 溶葡萄球菌酶的单半胱氨酸突变体的构建及其溶菌活性研究 | 第69-72页 |
| 3.5.5 溶葡萄球菌酶的双半胱氨酸突变体的构建和交联分析 | 第72-73页 |
| 3.5.6 二硫键交联突变体(K332C/T464C)的生物活性分析 | 第73-75页 |
| 四、讨论 | 第75-78页 |
| 参考文献 | 第78-90页 |
| 总结与展望 | 第90-92页 |
| 博士期间发表的论文 | 第92-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
