| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-38页 |
| 1 DEPTOR研究进展 | 第14-35页 |
| 1.1 DEPTOR的发现 | 第14-15页 |
| 1.2 DEPTOR的结构特征 | 第15-16页 |
| 1.3 小鼠DEPTOR的剪接变体 | 第16页 |
| 1.4 DEPTOR的表达调控 | 第16-19页 |
| 1.4.1 DEPTOR转录调控 | 第16-18页 |
| 1.4.2 DEPTOR翻译后调控 | 第18-19页 |
| 1.5 DEPTOR与m TOR的关系 | 第19-23页 |
| 1.5.1 mTOR简介 | 第19-22页 |
| 1.5.2 mTOR和DEPTOR | 第22-23页 |
| 1.6 DEPTOR的功能概述 | 第23-29页 |
| 1.6.1 DEPTOR与细胞存活 | 第23-24页 |
| 1.6.2 DEPTOR与细胞增殖 | 第24-25页 |
| 1.6.3 DEPTOR与成脂分化 | 第25-26页 |
| 1.6.4 DEPTOR与细胞干性 | 第26页 |
| 1.6.5 DEPTOR与自噬 | 第26-28页 |
| 1.6.6 DEPTOR与炎症 | 第28-29页 |
| 1.7 DEPTOR与疾病 | 第29-35页 |
| 1.7.1 DEPTOR与肥胖 | 第30页 |
| 1.7.2 DEPTOR与多发性骨髓瘤 | 第30-31页 |
| 1.7.3 DEPTOR与肝癌的关系 | 第31-32页 |
| 1.7.4 DEPTOR与甲状腺癌的关系 | 第32页 |
| 1.7.5 DEPTOR与上皮细胞-间充质转化（EMT）的关系 | 第32-33页 |
| 1.7.6 DEPTOR与肌肉萎缩的关系 | 第33-34页 |
| 1.7.7 DEPTOR与其他疾病 | 第34-35页 |
| 2 肝脏与炎症 | 第35-37页 |
| 2.1 肝脏的结构与功能 | 第35页 |
| 2.2 肝脏与炎症 | 第35-36页 |
| 2.3 炎症相关因子 | 第36-37页 |
| 3 研究目的与意义 | 第37-38页 |
| 第二章 DEPTOR表达调控及功能 | 第38-97页 |
| 1 前言 | 第38-39页 |
| 2 材料与方法 | 第39-58页 |
| 2.1 实验材料 | 第39页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第39页 |
| 2.1.2 载体及菌株 | 第39页 |
| 2.1.3 实验细胞 | 第39页 |
| 2.2 实验试剂及溶液配制 | 第39-42页 |
| 2.2.1 主要试剂 | 第39-40页 |
| 2.2.2 主要溶液配制 | 第40-42页 |
| 2.3 主要仪器设备 | 第42-43页 |
| 2.4 相关生物学软件 | 第43页 |
| 2.5 实验方法 | 第43-58页 |
| 2.5.1 细胞培养、转染、刺激 | 第43-44页 |
| 2.5.1.1 细胞培养 | 第43页 |
| 2.5.1.2 细胞转染 | 第43页 |
| 2.5.1.3 细胞刺激 | 第43-44页 |
| 2.5.2 总RNA提取、RNA浓度检测和反转录 | 第44-46页 |
| 2.5.2.1 总RNA提取 | 第44页 |
| 2.5.2.2 总RNA的纯化处理 | 第44-45页 |
| 2.5.2.3 RNA浓度检测 | 第45页 |
| 2.5.2.4 cDNA的合成 | 第45-46页 |
| 2.5.3 基因组DNA提取 | 第46页 |
| 2.5.4 载体构建 | 第46-51页 |
| 2.5.4.1 目的片段扩增 | 第46-48页 |
| 2.5.4.2 DNA凝胶电泳 | 第48页 |
| 2.5.4.3 DNA凝胶电泳回收 | 第48页 |
| 2.5.4.4 连接 | 第48-49页 |
| 2.5.4.5 感受态制备 | 第49-50页 |
| 2.5.4.6 转化 | 第50页 |
| 2.5.4.7 单克隆培养及鉴定 | 第50页 |
| 2.5.4.8 质粒小量提取 | 第50页 |
| 2.5.4.9 质粒大量提取 | 第50-51页 |
| 2.5.5 双荧光素酶实验 | 第51-52页 |
| 2.5.6 实时荧光定量PCR（qRT-PCR） | 第52页 |
| 2.5.7 Western blot | 第52-54页 |
| 2.5.7.1 总蛋白质的提取 | 第52-53页 |
| 2.5.7.2 BCA法测定蛋白浓度 | 第53页 |
| 2.5.7.3 SDS-PAGE胶 | 第53页 |
| 2.5.7.4 Western blot | 第53-54页 |
| 2.5.8 染色质免疫共沉淀（Ch IP） | 第54-55页 |
| 2.5.9 ELISA检测 | 第55-56页 |
| 2.5.10 培养基中糖测定 | 第56页 |
| 2.5.11 糖原测定 | 第56页 |
| 2.5.12 线粒体染色 | 第56-57页 |
| 2.5.13 小鼠炎症模型的建立 | 第57页 |
| 2.5.14 实验数据统计分析 | 第57-58页 |
| 3 结果与分析 | 第58-93页 |
| 3.1 小鼠炎症模型的构建与检测 | 第58-61页 |
| 3.1.1 小鼠炎症模型的构建 | 第58页 |
| 3.1.2 小鼠炎症模型的检测 | 第58-61页 |
| 3.2 炎症模型小鼠中DEPTOR表达及mTOR信号通路活性的变化 | 第61-64页 |
| 3.2.1 炎症模型小鼠不同组织中DEPTOR mRNA的表达 | 第61页 |
| 3.2.2 炎症模型小鼠肝脏中DEPTOR蛋白的表达 | 第61-62页 |
| 3.2.3 炎症模型小鼠肝脏中mTORC1/2 信号通路活性变化 | 第62-64页 |
| 3.3 LPS诱导小鼠肝细胞中DEPTOR表达下调及mTOR信号通路活性变化 | 第64-67页 |
| 3.3.1 不同浓度LPS刺激Hepa1-6 细胞对DEPTOR mRNA表达水平的影响 | 第64-65页 |
| 3.3.2 LPS刺激Hepa1-6 细胞不同时间对DEPTOR mRNA表达水平的影响 | 第65-66页 |
| 3.3.3 LPS刺激Hepa1-6 细胞不同时间对DEPTOR蛋白表达水平的影响 | 第66-67页 |
| 3.3.4 LPS刺激Hepa1-6 细胞不同时间对mTOR1/2 信号通路的影响 | 第67页 |
| 3.4 p65抑制DEPTOR的表达 | 第67-72页 |
| 3.4.1 LPS对p65蛋白的作用 | 第68-69页 |
| 3.4.2 Hepa1-6 细胞超表达p65抑制DEPTOR的表达 | 第69-70页 |
| 3.4.3 Hepa1-6 细胞超表达p65和LPS刺激对DEPTOR的影响 | 第70-71页 |
| 3.4.4 NF-κB抑制物减弱LPS对DEPTOR的作用 | 第71-72页 |
| 3.5 LPS/p65对小鼠DEPTOR转录变体的影响 | 第72-76页 |
| 3.5.1 小鼠DEPTOR转录变体介绍 | 第72-73页 |
| 3.5.2 LPS/p65对DEPTOR a/b mRNA表达水平的影响 | 第73-76页 |
| 3.6 p65结合DEPTOR启动子抑制其活性 | 第76-81页 |
| 3.6.1 DEPTOR启动子NF-κB结合位点预测 | 第76页 |
| 3.6.2 p65结合小鼠DEPTOR启动子的ChIP分析 | 第76-78页 |
| 3.6.3 DEPTOR启动子克隆及其pGL3 Basic载体构建 | 第78-79页 |
| 3.6.4 p65对DEPTOR启动子活性的影响 | 第79-81页 |
| 3.7 小鼠DEPTOR基因克隆及其真核表达载体、干扰载体构建 | 第81-83页 |
| 3.8 DEPTOR促进炎症因子MCP-1 表达 | 第83-87页 |
| 3.8.1 Hepa1-6 细胞超表达DEPTOR对炎症因子的影响 | 第83-84页 |
| 3.8.2 Hepa1-6 细胞中DEPTOR敲减对炎症因子的影响 | 第84-86页 |
| 3.8.3 Hepa1-6 细胞超表达DEPTOR促进MCP-1 蛋白表达 | 第86-87页 |
| 3.9 Rapamycin对炎症因子的影响 | 第87-89页 |
| 3.10 DEPTOR促进Hepa1-6 细胞糖吸收和糖原积累 | 第89-91页 |
| 3.11 DEPTOR下调Hepa1-6 细胞线粒体数目 | 第91-93页 |
| 4 讨论 | 第93-97页 |
| 第三章 结论、创新点与不足之处 | 第97-98页 |
| 1 结论 | 第97页 |
| 2 创新点 | 第97页 |
| 3 不足之处 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-113页 |
| 附录 | 第113-116页 |
| 研究生期间发表的论文情况 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
