中文摘要 | 第4-6页 |
Abstract | 第6-7页 |
中英文对照 | 第12-13页 |
第1章 绪论 | 第13-21页 |
1.1 肝脏疾病 | 第13-15页 |
1.1.1 肝损伤及其治疗 | 第13-14页 |
1.1.2 肝纤维化与肝星形细胞研究进展 | 第14-15页 |
1.2 干细胞与干细胞治疗 | 第15-18页 |
1.2.1 骨髓间充质干细胞 | 第16-17页 |
1.2.2 骨髓间充质干细胞治疗肝纤维化的途径 | 第17-18页 |
1.3 白细胞介素-10 | 第18-21页 |
1.3.1 白细胞介素-10 的主要功能 | 第18页 |
1.3.2 白细胞介素-10 抗肝纤维化作用机制 | 第18-21页 |
第2章 材料与试剂 | 第21-25页 |
2.1 实验动物 | 第21页 |
2.2 仪器 | 第21-22页 |
2.3 试剂 | 第22-23页 |
2.4 主要试剂的配方 | 第23-25页 |
2.4.1 磷酸盐缓冲液(PBS)的配制 | 第23页 |
2.4.2 10×TBS、1×TBST的配制 | 第23页 |
2.4.3 基础培养基的配制 | 第23页 |
2.4.4 成脂培养基 | 第23-24页 |
2.4.5 成骨培养基 | 第24页 |
2.4.6 1L 0.25%胰酶-EDTA配制 | 第24-25页 |
第3章 实验方法 | 第25-32页 |
3.1 BMSCs的分离培养和鉴定 | 第25-26页 |
3.1.1 密度梯度离心法分离BMSCs | 第25页 |
3.1.2 BMSCs的培养 | 第25页 |
3.1.3 BMSCs的鉴定 | 第25-26页 |
3.1.3.1 免疫组化检测BMSCs特异性表型 | 第25-26页 |
3.1.3.2 BMSCs的成骨成脂诱导分化实验 | 第26页 |
3.2 HSCs的分离培养与鉴定 | 第26-28页 |
3.2.1 非灌流法提取HSCs | 第26-27页 |
3.2.2 HSCs的鉴定 | 第27-28页 |
3.2.2.1 免疫组化检测大鼠HSCs的特异性蛋白 | 第27-28页 |
3.2.2.2 大鼠HSCs的油红O染色及苏木素染色 | 第28页 |
3.3 BMSCs上清对HSCs的影响 | 第28-29页 |
3.3.1 第3代BMSCs生长曲线的绘制 | 第28页 |
3.3.2 第3代BMSCs培养上清的收集 | 第28页 |
3.3.3 第3代BMSCs培养上清中IL-10 浓度检测 | 第28-29页 |
3.3.4 BMSCs上清作用于HSCs实验 | 第29页 |
3.4 BMSCs与HSCs Transwell共培养 | 第29-31页 |
3.4.1 实验分组 | 第29页 |
3.4.2 细胞上清收集和细胞形态观察 | 第29-30页 |
3.4.3 HSCs上清中IL-10 和TGF-β1 的浓度检测 | 第30页 |
3.4.4 Western blot检测HSCs中caspase-3 和α-SMA蛋白的表达 | 第30-31页 |
3.4.4.1 HSCs细胞全蛋白的提取 | 第30页 |
3.4.4.2 蛋白定量 | 第30页 |
3.4.4.3 SDS-PAGE电泳 | 第30-31页 |
3.5 数据统计 | 第31-32页 |
第4章 实验结果 | 第32-46页 |
4.1 BMSCs的分离培养与鉴定 | 第32-34页 |
4.2 HSCs的分离培养与鉴定 | 第34-37页 |
4.2.1 细胞形态学观察 | 第34页 |
4.2.2 HSCs的油红O染色结果 | 第34-35页 |
4.2.3 免疫组化检测HSCs特异性蛋白的表达结果 | 第35-36页 |
4.2.4 HSCs第 2、5 代细胞GFAP免疫组化结果 | 第36-37页 |
4.3 BMSCs上清对HSCs的作用 | 第37-40页 |
4.3.1 第3代BMSCs生长曲线的绘制 | 第37-38页 |
4.3.2 第3代BMSCs上清中IL-10 浓度的检测 | 第38页 |
4.3.3 BMSCs上清作用后HSCs细胞形态学变化 | 第38-39页 |
4.3.4 BMSCs上清作用后HSCs生长曲线的变化 | 第39-40页 |
4.4 BMSCs与HSCs Transwell共培养结果 | 第40-46页 |
4.4.1 HSCs的细胞形态学变化 | 第40-41页 |
4.4.2 Elisa检测HSCs上清中IL-10 和TGF-β1 的浓度 | 第41-43页 |
4.4.3 共培养后HSCsα-SMA和caspase-3 蛋白的表达情况 | 第43-46页 |
第5章 结论 | 第46-47页 |
第6章 讨论 | 第47-51页 |
参考文献 | 第51-58页 |
作者简介 | 第58-59页 |
致谢 | 第59页 |