| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第1章 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 常见致病菌及其毒力因子和危害 | 第9-12页 |
| 1.1.1 常见的致病菌及其毒力因子 | 第9-10页 |
| 1.1.2 常见致病菌的危害 | 第10-12页 |
| 1.2 目前的检测方法及缺陷 | 第12-15页 |
| 1.2.1 目前的主要检测方法 | 第12-13页 |
| 1.2.2 目前检测方法的缺陷 | 第13-15页 |
| 第2章 四重实时荧光PCR方法的建立 | 第15-33页 |
| 2.1 引言 | 第15页 |
| 2.2 特异性引物及探针的筛选 | 第15页 |
| 2.2.1 仪器与材料 | 第15页 |
| 2.3 引物和探针的设计 | 第15-16页 |
| 2.4 细菌基因组的提取 | 第16-17页 |
| 2.5 四重实时荧光PCR方法的建立 | 第17页 |
| 2.6 结果与讨论 | 第17-32页 |
| 2.6.1 tdh特异性引物和探针的筛选 | 第17-19页 |
| 2.6.2 sea特异性引物和探针的筛选 | 第19-21页 |
| 2.6.3 cesA的特异性引物和探针的筛选 | 第21-22页 |
| 2.6.4 sta特异性引物的筛选 | 第22-23页 |
| 2.6.5 四重实时荧光PCR检测4种致病菌毒素基因 | 第23-32页 |
| 2.7 小结 | 第32-33页 |
| 第3章 金黄色葡萄球菌肠毒素A和耐热直接溶血素的制备 | 第33-41页 |
| 3.1 引言 | 第33页 |
| 3.2 实验试剂及仪器 | 第33-34页 |
| 3.2.1 实验试剂和材料 | 第33-34页 |
| 3.2.2 仪器 | 第34页 |
| 3.3 实验 | 第34-35页 |
| 3.3.1 rSEA和rTDH亚基基因的重组质粒的转化、诱导表达及纯化 | 第34-35页 |
| 3.3.2 rSEA和rTDH亚基的标签切除及纯化 | 第35页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第35-40页 |
| 3.4.1 培养温度对rSEA和rTDH亚基表达效率的影响 | 第35-36页 |
| 3.4.2 培养时间对rSEA和rTDH亚基表达量的影响 | 第36-37页 |
| 3.4.3 rSEA和rTDH亚基的纯化 | 第37-38页 |
| 3.4.4 酶切温度对切除标签效率的影响 | 第38-39页 |
| 3.4.5 切除标签率达到 100%所需酶切时间 | 第39-40页 |
| 3.5 小结 | 第40-41页 |
| 第4章 HPLC-ESI-TOF分析毒素 | 第41-65页 |
| 4.1 引言 | 第41页 |
| 4.2 实验试剂和仪器 | 第41页 |
| 4.2.1 试剂和材料 | 第41页 |
| 4.2.2 仪器 | 第41页 |
| 4.3 实验 | 第41-42页 |
| 4.3.1 HPLC-ESI-TOF分析TDH | 第41页 |
| 4.3.2 HPLC-ESI-TOF分析SEA | 第41-42页 |
| 4.3.3 HPLC-ESI-TOF分析cereulide | 第42页 |
| 4.3.4 HPLC-ESI-TOF分析STa | 第42页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第42-64页 |
| 4.4.1 流动相中甲酸的含量对毒素在质谱中响应的影响 | 第42-50页 |
| 4.4.2 洗脱溶剂中水相和有机相比例对毒素检测灵敏度的影响 | 第50-58页 |
| 4.4.3 毒素在质谱中的分子离子 | 第58-64页 |
| 4.5 小结 | 第64-65页 |
| 结论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
