| 摘要 | 第13-15页 |
| Abstract | 第15-16页 |
| 前言 | 第17-27页 |
| 1 细菌神经氨酸酶与细胞粘附性的关系 | 第17-19页 |
| 1.1 神经氨酸酶的简介 | 第17-18页 |
| 1.2 病原菌神经氨酸酶与细胞的粘附性 | 第18-19页 |
| 1.2.1 革兰氏阳性菌神经氨酸酶与细胞的粘附性 | 第18-19页 |
| 1.2.2 革兰氏阴性菌神经氨酸酶与细胞的粘附性 | 第19页 |
| 2 化脓隐秘杆菌神经氨酸酶研究进展 | 第19-22页 |
| 2.1 化脓隐秘杆菌神经氨酸酶 | 第19-20页 |
| 2.2 化脓隐秘杆菌神经氨酸酶NanH | 第20-21页 |
| 2.3 化脓隐秘杆菌神经氨酸酶NanP | 第21页 |
| 2.4 NanH和NanP的致病性 | 第21-22页 |
| 3 细菌毒力与β-内酰胺类抗生素耐药的相关性 | 第22-25页 |
| 3.1 青霉素结合蛋白的改变对细菌耐药性和毒力的影响 | 第23-24页 |
| 3.2 β-内酰胺酶的表达对细菌耐药性和毒力的影响 | 第24页 |
| 3.3 外膜孔蛋白对细菌耐药性和毒力的影响 | 第24-25页 |
| 3.4 外排泵对细菌耐药性和毒力的影响 | 第25页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第25-27页 |
| 试验一 化脓隐秘隐秘毒力基因nanH的原核表达与多克隆抗体的制备 | 第27-52页 |
| 1.1 试验材料 | 第27-30页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第27页 |
| 1.1.2 菌种与载体 | 第27页 |
| 1.1.3 主要试剂和抗体 | 第27-28页 |
| 1.1.4 主要培养基及溶液的配制 | 第28-30页 |
| 1.1.5 主要仪器和设备 | 第30页 |
| 1.1.6 主要耗材 | 第30页 |
| 1.2 方法 | 第30-43页 |
| 1.2.1 化脓隐秘杆菌nanH基因的扩增 | 第30-33页 |
| 1.2.2 nanH基因重组表达载体的构建及表达 | 第33-36页 |
| 1.2.3 NanH-6his蛋白的纯化 | 第36-38页 |
| 1.2.4 重组蛋白的Western-blot鉴定 | 第38-41页 |
| 1.2.5 纯化后目的蛋白含量的测定 | 第41-42页 |
| 1.2.6 化脓隐秘杆菌NanH的多克隆抗体制备 | 第42页 |
| 1.2.7 兔抗His-NanH蛋白多克隆抗体的反应性检测 | 第42-43页 |
| 1.2.8 兔抗His-NanH血清效价的测定 | 第43页 |
| 1.3 结果与分析 | 第43-49页 |
| 1.3.1 化脓隐秘杆菌标准菌株ATCC19411基因组DNA提取结果 | 第43-44页 |
| 1.3.2 化脓隐秘杆菌nanH基因的PCR扩增结果 | 第44-45页 |
| 1.3.3 重组表达质粒的构建和PCR鉴定结果 | 第45页 |
| 1.3.4 目的基因序列测定和分析 | 第45页 |
| 1.3.5 NanH的原核表达与SDS-PAGE分析 | 第45-46页 |
| 1.3.6 重组蛋白可溶性表达条件优化和目的蛋白的纯化结果 | 第46-47页 |
| 1.3.7 重组蛋白Western-blot鉴定结果 | 第47页 |
| 1.3.8 兔抗His-NanH多克隆抗体的制备与反应性分析 | 第47-48页 |
| 1.3.9 兔抗化脓隐秘杆菌His-NanH多克隆抗体效价测定 | 第48-49页 |
| 1.4 讨论 | 第49-51页 |
| 1.4.1 化脓隐秘杆菌神经氨酸酶的作用 | 第49页 |
| 1.4.2 nanH基因原核表达 | 第49-50页 |
| 1.4.3 诱导表达条件的优化 | 第50-51页 |
| 1.4.4 兔抗化脓隐秘杆菌NanH多克隆抗体的制备及鉴定 | 第51页 |
| 1.5 小结 | 第51-52页 |
| 试验二 化脓隐秘杆菌NanH表达量与β-内酰胺类药物耐药相关性研究 | 第52-64页 |
| 2.1 试验材料 | 第52-53页 |
| 2.1.1 菌种 | 第52页 |
| 2.1.2 主要试剂和抗体 | 第52-53页 |
| 2.1.3 实验器材 | 第53页 |
| 2.2 试验方法 | 第53-58页 |
| 2.2.1 细菌的培养 | 第53页 |
| 2.2.2 细菌总蛋白的提取 | 第53-54页 |
| 2.2.3 细菌总蛋白含量的测定 | 第54页 |
| 2.2.4 Western-blot检测化脓隐秘杆菌NanH表达水平 | 第54-58页 |
| 2.3 结果与分析 | 第58-61页 |
| 2.3.1 化脓隐秘杆菌NanH表达量分析 | 第58-59页 |
| 2.3.2 化脓隐秘杆菌NanH表达量与β-内酰胺类抗生素耐药相关性分析 | 第59-61页 |
| 2.4 讨论 | 第61-63页 |
| 2.4.1 Western-blot测定化脓隐秘杆菌NanH表达水平方法的建立 | 第61-62页 |
| 2.4.2 关于化脓隐秘杆菌NanH表达量与β-内酰胺类药物耐药的相关性 | 第62-63页 |
| 2.5 小结 | 第63-64页 |
| 试验三 化脓隐秘杆菌对Hela细胞的粘附作用与β-内酰胺类药物耐药相关性研究 | 第64-71页 |
| 3.1 试验材料 | 第64-66页 |
| 3.1.1 菌种 | 第64页 |
| 3.1.2 细胞株 | 第64页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第64页 |
| 3.1.4 主要仪器和设备 | 第64-65页 |
| 3.1.5 溶液和培养基配制 | 第65-66页 |
| 3.2 试验方法 | 第66-67页 |
| 3.2.1 化脓隐秘杆菌的培养 | 第66页 |
| 3.2.2 细胞培养 | 第66页 |
| 3.2.3 化脓隐秘杆菌菌悬液的制备 | 第66页 |
| 3.2.4 粘附计数 | 第66页 |
| 3.2.5 统计分析 | 第66-67页 |
| 3.3 结果与分析 | 第67-69页 |
| 3.3.1 化脓隐秘杆菌对Hela细胞的粘附性比较 | 第67-68页 |
| 3.3.2 化脓隐秘杆菌对Hela细胞粘附与NanH表达量的关系 | 第68-69页 |
| 3.4 讨论 | 第69-70页 |
| 3.5 小结 | 第70-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读硕士学位期间发表的文章 | 第79页 |
