| 摘要 | 第4-7页 |
| SUMMARY | 第7-10页 |
| 缩略词 | 第11-20页 |
| 文献综述 | 第20-32页 |
| 第一章 哺乳动物辅助繁殖技术 | 第20-27页 |
| 1. 人工授精 | 第20-21页 |
| 1.1 人工授精背景 | 第20页 |
| 1.2 人工授精原因 | 第20-21页 |
| 2. 体外受精-胚胎移植 | 第21页 |
| 2.1 体外受精-胚胎移植背景 | 第21页 |
| 2.2 意义 | 第21页 |
| 3. 胞浆内精子注射技术 | 第21-23页 |
| 3.1 研究背景 | 第21-22页 |
| 3.2 影响ICSI产生胚胎发育能力因素 | 第22页 |
| 3.2.1 精子影响ICSI合子发育因素 | 第22页 |
| 3.2.2 卵母细胞影响ICSI合子发育因素 | 第22页 |
| 3.3 家畜ICSI研究前景 | 第22-23页 |
| 4. 表观遗传学 | 第23-24页 |
| 4.1 基因组印记与DNA甲基化 | 第23页 |
| 4.2 X染色体失活 | 第23-24页 |
| 5. 玻璃化冷冻 | 第24-25页 |
| 5.1 玻璃化冷冻保护剂的选择 | 第24页 |
| 5.2 卵母细胞冻存原理 | 第24页 |
| 5.3 玻璃化冷冻方法研究进展 | 第24-25页 |
| 5.4 玻璃化冷冻的应用 | 第25页 |
| 6. 胚胎及子宫内膜外泌体在辅助生殖技术中的作用 | 第25-27页 |
| 6.1 胞外膜泡与植入概述 | 第25页 |
| 6.2 胚胎起源EV对胚胎的影响 | 第25-26页 |
| 6.3 子宫内膜及胚胎促进胞外囊泡分泌 | 第26-27页 |
| 第二章 生长因子调节哺乳动物体外胚胎发育 | 第27-30页 |
| 1. 哺乳动物体外胚胎附植前发育 | 第27页 |
| 2. 生长因子和动物附植前胚胎发育 | 第27-28页 |
| 3. 生长因子和人类胚胎发育 | 第28-29页 |
| 4. 结论 | 第29-30页 |
| 第三章 细胞凋亡在胚胎发育中的作用 | 第30-32页 |
| 1. 附植前胚胎凋亡的生理学特征 | 第30-31页 |
| 2. 凋亡与母体环境的关系 | 第31页 |
| 3. 总结 | 第31-32页 |
| 实验研究 | 第32-89页 |
| 实验一 IGF-I通过调控AQP3及凋亡相关基因提高牦牛IVF胚胎发育能力及COCs冷冻适应性 | 第32-52页 |
| 1. 材料与方法 | 第33-40页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第33-34页 |
| 1.2 牦牛卵巢采集及卵丘卵母细胞复合体体外成熟培养 | 第34页 |
| 1.3 玻璃化冷冻与解冻 | 第34-35页 |
| 1.4 恢复培养 | 第35页 |
| 1.5 体外受精 | 第35页 |
| 1.6 胚胎发育 | 第35-36页 |
| 1.7 胚胎发育评估 | 第36页 |
| 1.8 胚胎不同染色方法及细胞计数 | 第36-37页 |
| 1.9 免疫荧光染色检测囊胚中AQP3蛋白表达 | 第37页 |
| 1.10 AQP3蛋白表达分析 | 第37-38页 |
| 1.11 基因表达分析 | 第38-39页 |
| 1.11.1 引物设计 | 第38页 |
| 1.11.2 RNA的提取及cDNA合成 | 第38页 |
| 1.11.3 Real-time PCR检测Bax、Bcl-2、AQP3的表达 | 第38-39页 |
| 1.12 实验设计 | 第39-40页 |
| 2. 结果 | 第40-48页 |
| 2.1 牦牛囊胚中AQP3基因表达水平 | 第40-42页 |
| 2.2 牦牛囊胚中AQP3蛋白表达水平 | 第42-44页 |
| 2.3 牦牛囊胚中Bax和Bcl-2 基因表达水平 | 第44-45页 |
| 2.4 囊胚中ICM和TE分布及细胞计数。 | 第45-47页 |
| 2.5 不同组牦牛囊胚发育能力 | 第47-48页 |
| 3. 讨论 | 第48-51页 |
| 4. 结论 | 第51-52页 |
| 实验二 IGF-I通过调控Glut-1及凋亡相关基因提高牦牛IVF胚胎发育能力 | 第52-65页 |
| 1. 材料与方法 | 第54-57页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第54页 |
| 1.2 牦牛卵巢采集及卵丘卵母细胞复合体体外成熟培养 | 第54页 |
| 1.3 体外受精 | 第54-55页 |
| 1.4 体外胚胎培养 | 第55页 |
| 1.5 胚胎不同染色方法及细胞计数 | 第55-56页 |
| 1.6 基因表达分析 | 第56-57页 |
| 1.6.1 引物设计 | 第56页 |
| 1.6.2 RNA提取和cDNA合成 | 第56页 |
| 1.6.3 Real-time PCR检测Bax，Bcl-2，GLUT-1的表达 | 第56-57页 |
| 1.7 实验设计 | 第57页 |
| 1.8 数据分析 | 第57页 |
| 2. 结果 | 第57-62页 |
| 2.1 牦牛胚胎中凋亡相关基因表达 | 第57-58页 |
| 2.2 牦牛胚胎中Glut-1基因表达 | 第58-59页 |
| 2.3 囊胚中ICM和TE分布及细胞计数。 | 第59-61页 |
| 2.4 不同组牦牛囊胚发育能力 | 第61-62页 |
| 3. 讨论 | 第62-64页 |
| 4. 结论 | 第64-65页 |
| 实验三 EGF通过调控Cx43和HSP90基因提高牦牛孤雌胚胎发育能力 | 第65-78页 |
| 1. 材料与方法 | 第66-70页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第66页 |
| 1.2 牦牛卵巢采集及卵丘卵母细胞复合体体外成熟培养 | 第66-67页 |
| 1.3 孤雌激活 | 第67-68页 |
| 1.4 体外胚胎培养 | 第68-69页 |
| 1.5 基因表达分析 | 第69-70页 |
| 1.5.1 引物设计 | 第69页 |
| 1.5.2 RNA提取和cDNA合成 | 第69页 |
| 1.5.3 Real-time PCR检测Cx43、HSP90的表达 | 第69-70页 |
| 1.6 实验设计 | 第70页 |
| 1.7 数据分析 | 第70页 |
| 2. 结果 | 第70-74页 |
| 2.1 不同处理组卵母细胞成熟率统计 | 第70-71页 |
| 2.2 不同处理组牦牛胚胎发育 | 第71页 |
| 2.3 不同组牦牛孤雌激活胚胎中Cx43基因表达 | 第71-73页 |
| 2.4 不同组牦牛孤雌激活胚胎中HSP90基因表达 | 第73-74页 |
| 3. 讨论 | 第74-77页 |
| 4. 结论 | 第77-78页 |
| 实验四 LIF通过调控STAT3基因提高牦牛IVF胚胎发育能力 | 第78-89页 |
| 1. 材料与方法 | 第79-81页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第79页 |
| 1.2 牦牛卵巢采集及卵丘卵母细胞复合体体外成熟培养 | 第79页 |
| 1.3 体外受精 | 第79页 |
| 1.4 体外胚胎培养 | 第79-80页 |
| 1.5 基因表达分析 | 第80-81页 |
| 1.5.1 引物设计 | 第80页 |
| 1.5.2 RNA提取及cDNA合成 | 第80页 |
| 1.5.3 Real-time PCR检测STAT3表达 | 第80-81页 |
| 1.6 免疫荧光染色检测卵母细胞和胚胎中STAT3蛋白表达 | 第81页 |
| 1.7 实验设计与数据分析 | 第81页 |
| 2. 结果 | 第81-85页 |
| 2.1 STAT3 mRNA在牦牛COCs和胚胎各时期发育中的表达 | 第81-85页 |
| 2.3 LIF对牦牛卵母细胞及移植前胚胎发育的影响 | 第85页 |
| 3. 讨论 | 第85-88页 |
| 4. 结论 | 第88-89页 |
| 全文总结 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 作者简介 | 第122-123页 |
| 导师简介 | 第123-125页 |
