| 中文摘要 | 第8-11页 |
| 英文摘要 | 第11页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-51页 |
| 1．1 基因工程 | 第15-17页 |
| 1．1．1 基因工程的定义及其基本过程 | 第16页 |
| 1．1．2 基因工程的基本原理 | 第16-17页 |
| 1．1．3 基因工程的发展与应用 | 第17页 |
| 1．2 基因工程菌培养过程中存在的主要问题及其对策 | 第17-28页 |
| 1．2．1 重组质粒的不稳定性及其对策 | 第18-21页 |
| 1．2．2 基因工程菌高密度培养过程中代谢副产物对重组菌生长和表达的影响 | 第21-24页 |
| 1．2．3 重组菌高密度发酵的氧传递问题 | 第24-28页 |
| 1．3 基因工程菌培养的生物反应器及动力学研究 | 第28-35页 |
| 1．3．1 生物反应器的基本类型及其性能 | 第28-29页 |
| 1．3．2 细胞的固定化与固定化细胞生物反应器 | 第29-31页 |
| 1．3．3 基因工程菌培养的动力学 | 第31-35页 |
| 1．4 人表皮生长因子和青霉素酰化酶概述 | 第35-44页 |
| 1．4．1 人表皮生长因子（hEGF） | 第35-39页 |
| 1．4．2 青霉素酰化酶 | 第39-44页 |
| 1．5 本工作的研究思路及拟研究的内容 | 第44-51页 |
| 第二章 材料、方法与设备 | 第51-62页 |
| 2．1 菌株与质粒 | 第51-53页 |
| 2．2 分析与测定方法 | 第53-59页 |
| 2．2．1 hEGF的定性与定量测定 | 第53-54页 |
| 2．2．2 糖浓度测定 | 第54-55页 |
| 2．2．3 pH值和菌体量的测定 | 第55页 |
| 2．2．4 青霉素酰化酶酶活测定 | 第55-57页 |
| 2．2．5 菌体可溶性总蛋白测定 | 第57页 |
| 2．2．6 质粒稳定性测定 | 第57-58页 |
| 2．2．7 感受态细胞制备及转化 | 第58页 |
| 2．2．8 质粒DNA的少量提取及保存 | 第58-59页 |
| 2．3 hEGF重组菌E．coli JM101的培养方法 | 第59-60页 |
| 2．4 主要实验仪器及设备 | 第60-62页 |
| 第三章 重组工程菌培养生产HEGF过程中大孔离子交换树脂的原位分离 | 第62-79页 |
| 3．1 材料与方法 | 第62-63页 |
| 3．1．1 离子交换树脂 | 第62页 |
| 3．1．2 hEGF重组菌及表达质粒 | 第62-63页 |
| 3．1．3 培养基 | 第63页 |
| 3．2 实验方法 | 第63-64页 |
| 3．2．1 树脂的预处理 | 第63页 |
| 3．2．2 树脂的选择 | 第63页 |
| 3．2．3 树脂动态吸附性能和静态吸附性能的测定 | 第63-64页 |
| 3．2．4 乙酸浓度的测定 | 第64页 |
| 3．2．5 树脂对分泌表达hEGF重组菌E．coli JM101影响 | 第64页 |
| 3．2．6 质粒转化及种子活化、保存 | 第64页 |
| 3．3 结果与讨论 | 第64-77页 |
| 3．3．1 分泌表达hEGF的重组菌E．coli JM101在摇瓶中的培养 | 第64-66页 |
| 3．3．2 乙酸对hEGF重组E．coli JM101生长的影响 | 第66-67页 |
| 3．3．3 乙酸对hEGF重组E．coli JM101外源基因表达的影响 | 第67-68页 |
| 3．3．4 离子交换树脂的筛选 | 第68-71页 |
| 3．3．5 离子交换树脂对hEGF重组E．coli JM101生长及其产物表达的影响 | 第71-73页 |
| 3．3．6 NaCl对重组菌生长的影响 | 第73-74页 |
| 3．3．7 接种量对重组菌生长的影响 | 第74-75页 |
| 3．3．8 树脂的原位吸附对重组菌生长的影响 | 第75-76页 |
| 3．3．9 重组菌E．coli JM101在2．5L B．Brown小型罐中的发酵—分离耦合过程 | 第76-77页 |
| 3．4 小结 | 第77-79页 |
| 第四章 聚氨酯泡沫固定化培养重组E．coli JM101及其hEGF表达的研究 | 第79-97页 |
| 4．1 材料与方法 | 第80页 |
| 4．1．1 菌株及质粒 | 第80页 |
| 4．1．2 固定化材料 | 第80页 |
| 4．1．3 固定化培养方法 | 第80页 |
| 4．1．4 分析与测定方法 | 第80页 |
| 4．2 实验结果与讨论 | 第80-90页 |
| 4．2．1 聚氨酯泡沫对重组菌E．coli JM101生长和HEGF表达的影响 | 第81-83页 |
| 4．2．2 固定化细胞培养过程中载体内外的菌体生长曲线及其质粒稳定性 | 第83-85页 |
| 4．2．3 三相流化床生物反应器中重组菌E．coli JM101的间歇培养 | 第85-90页 |
| 4．3 重组菌在鼓泡塔中培养的间歇发酵动力学 | 第90-94页 |
| 4．3．1 重组菌在鼓泡塔中游离培养的发酵动力学 | 第90-92页 |
| 4．3．2 固定化重组菌在三相流化床中培养的发酵动力学 | 第92-94页 |
| 4．4 小结 | 第94-97页 |
| 第五章 固定化重组E．coli JM101二段连续培养生产hEGF | 第97-110页 |
| 5．1 引言 | 第97-98页 |
| 5．2 鼓泡塔反应器的优点及其停留时间分布 | 第98-99页 |
| 5．3 材料与方法 | 第99-101页 |
| 5．3．1 培养基 | 第99页 |
| 5．3．2 种子活化及其培养 | 第99页 |
| 5．3．3 二阶段连续培养生物反应器 | 第99-100页 |
| 5．3．4 鼓泡塔反应器的基本性能—停留时间分布的测定 | 第100页 |
| 5．3．5 分析与测定方法 | 第100-101页 |
| 5．4 结果与讨论 | 第101-109页 |
| 5．4．1 NaCl溶液电导率的标准曲线 | 第101页 |
| 5．4．2 鼓泡塔和三相流化床的停留时间分布 | 第101-104页 |
| 5．4．3 稀释速率对三相流化床中菌体和限制性基质浓度的关系 | 第104-105页 |
| 5．4．4 稀释速率对重组菌的比生长速率及质粒稳定性的影响 | 第105-106页 |
| 5．4．5 稀释速率对目标产物hEGF表达量的影响（第二阶段） | 第106页 |
| 5．4．6 重菌组E．coli JM101二段连续培养生产HEGF（D=0．2h~（-1）） | 第106-108页 |
| 5．4．7 不同操作方式目的基因hEGF产物得率的比较 | 第108-109页 |
| 5．5 小结 | 第109-110页 |
| 第六章 pga基因整合菌发酵生产青霉素酰化酶培养条件研究 | 第110-129页 |
| 6．1 引言 | 第110-111页 |
| 6．2 材料与方法 | 第111-112页 |
| 6．2．1 菌株及其保藏 | 第111页 |
| 6．2．2 种子培养基 | 第111页 |
| 6．2．3 固体培养基 | 第111页 |
| 6．2．4 发酵培养基 | 第111页 |
| 6．2．5 种子的活化及培养 | 第111页 |
| 6．2．6 分析与测定方法 | 第111-112页 |
| 6．3 实验结果与讨论 | 第112-127页 |
| 6．3．1 发酵培养基的优化 | 第112-120页 |
| 6．3．2 青霉素酰化酶产生菌B．subtilisφ105MU331表达PGA条件的优化 | 第120-127页 |
| 6．4 小结 | 第127-129页 |
| 第七章 重组菌B．subtilis的半固定化两段培养和表达 | 第129-136页 |
| 7．1 材料与方法 | 第129-130页 |
| 7．1．1 菌种及保存方法 | 第129页 |
| 7．1．2 培养基 | 第129页 |
| 7．1．3 测定与分析方法 | 第129-130页 |
| 7．2 实验装置设计 | 第130页 |
| 7．3 重组Bacillus subtilis在三相流化床中培养生产 | 第130-134页 |
| 7．3．1 三相流化床反应器中不同通气量时重组菌的生长及PGA的表达 | 第130-132页 |
| 7．3．2 pga基因整合型B．subtilisφ105MU331的三段连续培养 | 第132-134页 |
| 7．4 小结 | 第134-136页 |
| 第八章 透明颤菌vgb基因整合型大肠杆菌的培养特性 | 第136-149页 |
| 8．1 材料与方法 | 第137-138页 |
| 8．1．1 培养基 | 第137页 |
| 8．1．2 测定与分析方法 | 第137页 |
| 8．1．3 培养方法 | 第137-138页 |
| 8．2 实验结果与讨论 | 第138-147页 |
| 8．2．1 引物合成与PCR扩增 | 第138页 |
| 8．2．2 发酵培养基的优化 | 第138-141页 |
| 8．2．3 装液量对E．coli BV菌体生长的影响 | 第141-142页 |
| 8．2．4 E．coli BL21与E．coli BV生长的比较 | 第142页 |
| 8．2．5 铁离子浓度对E．coli BV细胞生长和VHb表达的影响 | 第142-144页 |
| 8．2．6 E．coli BV在小型发酵罐中的间歇培养 | 第144-146页 |
| 8．2．7 小型发酵罐上的流加培养试验 | 第146-147页 |
| 8．3 小结 | 第147-149页 |
| 致谢 | 第149-150页 |
| 发表文章情况 | 第150页 |
