| 缩略语表 | 第6-8页 |
| 中文摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 前言 | 第14-15页 |
| 文献回顾 | 第15-25页 |
| 第一部分 LAMP2敲除对大鼠原代肝细胞胆管形成和MRP2分子定位的影响 | 第25-39页 |
| 1 材料和仪器 | 第25-28页 |
| 1.1 实验动物 | 第25-26页 |
| 1.2 实验试剂和耗材 | 第26页 |
| 1.3 主要仪器及设备 | 第26-27页 |
| 1.4 大鼠原代肝细胞分离和培养液的配置 | 第27-28页 |
| 2 方法 | 第28-32页 |
| 2.1 大鼠原代肝细胞分离 | 第28-29页 |
| 2.1 底层铺被胶原的制备与使用 | 第29页 |
| 2.2 上层胶原的配置与使用 | 第29-30页 |
| 2.3 原代细胞的培养 | 第30页 |
| 2.4 免疫荧光/激光共聚焦 | 第30页 |
| 2.5 MRP2转运功能实验 | 第30-31页 |
| 2.6 MRP2转运效率检测 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-37页 |
| 3.1 原代肝细胞分离结果 | 第32-33页 |
| 3.2 胶原三明治培养下原代肝细胞的形态学观察 | 第33-34页 |
| 3.3 观察LAMP2敲除大鼠原肝细胞胆管形成和MRP2分子的定位 | 第34-37页 |
| 3.4 LAMP2敲除大鼠原代肝细胞MRP2转运功能的检测 | 第37页 |
| 4 讨论 | 第37-39页 |
| 第二部分 HepG2细胞中LAMP2对极性分子MRP2的定位影响 | 第39-58页 |
| 1 材料 | 第40-43页 |
| 1.1 细胞株与实验材料 | 第40页 |
| 1.2 试剂 | 第40-42页 |
| 1.3 主要仪器 | 第42-43页 |
| 2 方法 | 第43-46页 |
| 2.1 细胞培养 | 第43页 |
| 2.2 蛋白样品提取 | 第43页 |
| 2.3 Western blot | 第43-44页 |
| 2.4 细胞RNA提取 | 第44页 |
| 2.5 qRT-PCR | 第44-45页 |
| 2.6 CD59转吞实验 | 第45-46页 |
| 3 结果 | 第46-56页 |
| 3.1 HepG2细胞极性模型的建立 | 第46-47页 |
| 3.2 LAMP2 siRNA HepG2细胞系的构建 | 第47-48页 |
| 3.3 LAMP-2 对Hep G2细胞系胆管形成的影响 | 第48-49页 |
| 3.4 观察HepG2细胞中LAMP2对极性分子MRP2的影响 | 第49-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 第三部分 LAMP2亚型对MRP2胆管膜上定位的影响 | 第58-67页 |
| 1 材料和试剂 | 第59页 |
| 1.1 细胞株 | 第59页 |
| 1.2 细胞培养试剂 | 第59页 |
| 1.3 普通PCR试剂 | 第59页 |
| 2 方法 | 第59-62页 |
| 2.1 PCR产物琼脂糖电泳法 | 第59-60页 |
| 2.2 普通PCR方法 | 第60-62页 |
| 3 结果 | 第62-67页 |
| 3.1 LAMP2A、LAMP2B基因敲除细胞系的鉴定 | 第62-65页 |
| 3.2 LAMP2A和LAMP2B对MRP2分子定位的影响 | 第65页 |
| 3.3 LAMP2A和LAMP2B敲出细胞中MRP2分子的亚定位 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67页 |
| 小结 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 个人简历和研究成果 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
