| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-21页 |
| 1.1 真菌源几丁质酶在植物抗真菌病害中的应用 | 第13-17页 |
| 1.1.1 几丁质酶及其特性 | 第13-14页 |
| 1.1.2 几丁质酶抑菌作用机制 | 第14页 |
| 1.1.3 几丁质酶的生防应用 | 第14-15页 |
| 1.1.4 转几丁质酶基因植物与抗病性 | 第15-16页 |
| 1.1.5 几丁质酶制品 | 第16-17页 |
| 1.2 激发子 | 第17-19页 |
| 1.2.1 激发子研究背景 | 第17页 |
| 1.2.2 激发子诱导植物防御反应早期事件 | 第17-18页 |
| 1.2.3 激发子诱导植物防御反应信号途径 | 第18页 |
| 1.2.4 激发子诱导防御相关基因的表达调控及诱导植物抗性 | 第18-19页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第19页 |
| 1.4 本研究技术路线 | 第19-21页 |
| 第二章 大丽轮枝菌内源几丁质酶基因VDECH的克隆、蛋白结构预测及表达量分析 | 第21-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.1 棉花黄萎病菌菌株 | 第21页 |
| 2.1.2 培养基及试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-25页 |
| 2.2.1 棉花黄萎病菌基因组DNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.2.2 棉花黄萎病菌RNA的提取和反转录 | 第22页 |
| 2.2.3 棉花黄萎病菌内源几丁质酶基因VDECH的克隆 | 第22-23页 |
| 2.2.4 PCR产物连接T载体、转化及测序 | 第23-24页 |
| 2.2.5 棉花黄萎病菌内源几丁质酶基因VDECH的生物信息学分析 | 第24页 |
| 2.2.6 棉花黄萎病菌内源几丁质酶基因VDECH的表达分析 | 第24-25页 |
| 2.3 结果分析 | 第25-30页 |
| 2.3.1 内源几丁质酶基因VDECH的克隆 | 第25-26页 |
| 2.3.2 内源几丁质酶基因VDECH的生物信息学分析 | 第26-27页 |
| 2.3.3 内源几丁质酶基因VDECH系统发育分析 | 第27-29页 |
| 2.3.4 VDECH基因表达分析 | 第29页 |
| 2.3.5 棉花不同组织对VDECH表达的诱导分析 | 第29-30页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 大丽轮枝菌内源几丁质酶基因VDECH的原核表达 | 第31-40页 |
| 3.1 实验材料 | 第31页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第31页 |
| 3.1.2 实验试剂和仪器设备 | 第31页 |
| 3.1.3 培养基与试剂配制 | 第31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-35页 |
| 3.2.1 VDECH原核表达载体的构建 | 第31-33页 |
| 3.2.2 VDECH重组蛋白的诱导表达 | 第33-34页 |
| 3.2.3 VDECH重组蛋白表达条件优化 | 第34页 |
| 3.2.4 目的蛋白的纯化 | 第34页 |
| 3.2.5 SDS-PAGE分析 | 第34-35页 |
| 3.2.6 纯化后目的蛋白浓度的测定 | 第35页 |
| 3.3 结果分析 | 第35-38页 |
| 3.3.1 VDECH信号肽预测 | 第35-36页 |
| 3.3.2 不同IPTG诱导浓度对VDECH蛋白表达量的影响 | 第36页 |
| 3.3.3 不同诱导温度对VDECH蛋白表达量的影响 | 第36-37页 |
| 3.3.4 VDECH的体外表达和纯化 | 第37页 |
| 3.3.5 蛋白浓度的测定 | 第37-38页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 植物对VDECH蛋白的初级免疫应答 | 第40-47页 |
| 4.1 实验材料 | 第40页 |
| 4.1.1 菌株与植物材料 | 第40页 |
| 4.1.2 培养基及其配制 | 第40页 |
| 4.1.3 主要生化试剂及其配制 | 第40页 |
| 4.1.4 仪器 | 第40页 |
| 4.2 实验方法 | 第40-42页 |
| 4.2.1 拟南芥的生长培养 | 第40-41页 |
| 4.2.2 VDECH蛋白液处理拟南芥幼苗叶片 | 第41页 |
| 4.2.3 棉花的生长培养 | 第41页 |
| 4.2.4 VDECH蛋白液处理棉花幼苗叶片 | 第41页 |
| 4.2.5 VDECH诱导拟南芥和棉花叶片过氧化氢积累的检测 | 第41页 |
| 4.2.6 重组蛋白的特性分析 | 第41-42页 |
| 4.3 结果分析 | 第42-45页 |
| 4.3.1 拟南芥叶片对不同浓度VDECH处理的反应 | 第42-43页 |
| 4.3.2 VDECH处理棉花叶片后不同时间叶片的反应 | 第43页 |
| 4.3.3 VDECH引起拟南芥和棉花叶片过氧化氢的积累 | 第43-44页 |
| 4.3.4 不同温度下VDECH蛋白活性检测 | 第44页 |
| 4.3.5 不同温度下VDECH蛋白酶活测定 | 第44-45页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 VDECH诱导棉花和拟南芥系统获得抗性 | 第47-56页 |
| 5.1 实验材料 | 第47页 |
| 5.1.1 菌株与植物材料 | 第47页 |
| 5.1.2 实验试剂和仪器 | 第47页 |
| 5.1.3 培养基与试剂配方 | 第47页 |
| 5.2 实验方法 | 第47-50页 |
| 5.2.1 VDECH诱导棉花对大丽轮枝菌的抗性实验 | 第47-48页 |
| 5.2.2 VDECH诱导棉花防御相关基因的表达 | 第48-49页 |
| 5.2.3 VDECH诱导拟南芥防御相关基因的表达 | 第49-50页 |
| 5.3 结果分析 | 第50-54页 |
| 5.3.1 VDECH诱导提高棉花对大丽轮枝菌抗性 | 第50-52页 |
| 5.3.2 VDECH诱导棉花防御相关基因的表达 | 第52-53页 |
| 5.3.3 VDECH诱导拟南芥防御相关基因的表达 | 第53-54页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第54-56页 |
| 第六章 VDECH抑制病原菌孢子萌发研究 | 第56-59页 |
| 6.1 实验材料 | 第56页 |
| 6.2 实验方法 | 第56-57页 |
| 6.2.1 大丽轮枝菌，尖孢镰刀菌孢子液的制备 | 第56页 |
| 6.2.2 VDECH抑制孢子萌发的测定 | 第56-57页 |
| 6.3 结果分析 | 第57-58页 |
| 6.3.1 VDECH对棉花黄萎病菌孢子萌发的影响 | 第57页 |
| 6.3.2 VDECH对棉花枯萎病菌孢子萌发的影响 | 第57-58页 |
| 6.4 小结与讨论 | 第58-59页 |
| 第七章 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简历 | 第69页 |
