| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9页 |
| 第一章 前言 | 第10-23页 |
| 1.1 草菇介绍 | 第10-15页 |
| 1.1.1 草菇的栽培历史 | 第10页 |
| 1.1.2 草菇的生物学特性 | 第10-11页 |
| 1.1.3 草菇的生活史 | 第11-13页 |
| 1.1.4 草菇的营养价值及其栽培特点 | 第13页 |
| 1.1.5 草菇的品系及常见栽培品种 | 第13-15页 |
| 1.1.6 草菇的分布及生产 | 第15页 |
| 1.2 草菇的采后保鲜 | 第15-18页 |
| 1.3 反义基因技术 | 第18-20页 |
| 1.3.1 反义基因技术原理 | 第18页 |
| 1.3.2 反义基因技术研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3.3 反义基因技术在控制生物性状上的应用 | 第19页 |
| 1.3.4 在动物及医学治疗上的应用 | 第19-20页 |
| 1.3.5 在植物上的应用 | 第20页 |
| 1.3.6 在真菌上的应用 | 第20页 |
| 1.4 TAIL-PCR | 第20-21页 |
| 1.5 本研究的独创性及应用前景 | 第21-23页 |
| 第二章 农杆菌转化条件优化 | 第23-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.2 实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.1 寡聚核苷酸引物 | 第23页 |
| 2.2.2 常用溶液 | 第23-24页 |
| 2.2.3 酶与生化试剂 | 第24页 |
| 2.3 培养基 | 第24页 |
| 2.4 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.4.1 农杆菌转化 | 第24-26页 |
| 2.4.2 农杆菌介导的草菇遗传转化 | 第26-27页 |
| 2.4.3 转化子的PCR鉴定 | 第27-28页 |
| 2.5 结果与分析 | 第28-34页 |
| 2.5.1 抗性梯度预实验 | 第28-29页 |
| 2.5.2 抗药性基因转农杆菌 | 第29-30页 |
| 2.5.3 农杆菌侵染草菇的条件优化 | 第30-34页 |
| 2.5.4 小结 | 第34页 |
| 2.6 讨论 | 第34-35页 |
| 第三章 反义基因导入草菇 | 第35-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第35页 |
| 3.2 实验试剂 | 第35页 |
| 3.3 培养基 | 第35页 |
| 3.4 实验方法 | 第35-37页 |
| 3.4.1 C58-OPN39侵染与转化子筛选 | 第35-36页 |
| 3.4.2 潮霉素浓度梯度复筛鉴定转化子 | 第36页 |
| 3.4.3 转化子的PCR鉴定 | 第36页 |
| 3.4.4 GUS表达活性鉴定 | 第36页 |
| 3.4.5 用以上同样方法转入OPN15质粒 | 第36页 |
| 3.4.6 出菇实验 | 第36-37页 |
| 3.5 结果与分析 | 第37-41页 |
| 3.5.1 C59-OPN39侵染与转化子筛选 | 第37页 |
| 3.5.2 潮霉素浓度梯度复筛鉴定转化子 | 第37-38页 |
| 3.5.3 转化子的PCR鉴定 | 第38页 |
| 3.5.4 GUS表达活性鉴定 | 第38-39页 |
| 3.5.5 VC58-OPN15验证结果 | 第39页 |
| 3.5.6 出菇实验 | 第39-41页 |
| 3.6 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 TAIL-PCR | 第43-52页 |
| 4.1 实验材料 | 第43页 |
| 4.2 实验试剂 | 第43-44页 |
| 4.2.1 常用溶液 | 第43页 |
| 4.2.2 酶与生化试剂 | 第43-44页 |
| 4.3 培养基 | 第44页 |
| 4.4 实验方法 | 第44-48页 |
| 4.4.1 菌丝培养 | 第44页 |
| 4.4.2 CTAB法提取DNA(参见第二章"实验与方法") | 第44页 |
| 4.4.3 TAIL-PCR | 第44-46页 |
| 4.4.4 克隆与测序 | 第46-48页 |
| 4.5 结果与分析 | 第48-52页 |
| 4.5.1 CTAB法提取DNA | 第48页 |
| 4.5.2 TAIL-PCR | 第48-49页 |
| 4.5.3 阳性克隆的检测(菌落PCR) | 第49页 |
| 4.5.4 测序结果 | 第49-52页 |
| 第五章 生物信息学分析 | 第52-57页 |
| 5.1 实验方法 | 第52-53页 |
| 5.1.1 去掉引物序列 | 第52页 |
| 5.1.2 ORF分析 | 第52-53页 |
| 5.1.3 ORF与核酸数据库进行序列比对 | 第53页 |
| 5.2 结果与分析 | 第53-56页 |
| 5.2.1 ORF分析结果 | 第53-55页 |
| 5.2.2 BLASTN序列比对 | 第55-56页 |
| 5.3 讨论 | 第56-57页 |
| 参考文献: | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61页 |