缩略语表 | 第7-9页 |
中文摘要 | 第9-12页 |
Abstract | 第12-15页 |
前言 | 第16-18页 |
文献回顾 | 第18-43页 |
一、HFRS 及 HTNV 概述 | 第18-20页 |
二、HTV 诱导的免疫应答 | 第20-31页 |
1. HTV 诱导的体液免疫应答 | 第21-25页 |
2. HTV 诱导的细胞免疫应答 | 第25-28页 |
3. HTV 感染与固有免疫应答 | 第28-31页 |
三、B 细胞表位及研究方法 | 第31-43页 |
1. B 细胞表位研究方法 | 第33-36页 |
2. HTV 结构蛋白 B 细胞表位的研究 | 第36-43页 |
第一部分 HTNV 核蛋白线性 B 细胞表位的筛选和鉴定 | 第43-72页 |
实验一 PEPSCAN 法 HTNV 核蛋白 B 细胞表位作图 | 第43-58页 |
1 材料 | 第44-45页 |
2 方法 | 第45-47页 |
2.1 合成肽的溶解 | 第45页 |
2.2 间接 ELISA 检测患者血清抗 NP 合成肽的反应谱 | 第45-46页 |
2.3 间接 ELISA 检测单克隆抗体抗 NP 合成肽的反应谱 | 第46页 |
2.4 统计学处理 | 第46-47页 |
3 结果 | 第47-52页 |
3.1 HFRS 患者血清抗体与 HTNV NP 合成肽反应谱 | 第47-50页 |
3.2 PepScan 数据处理 | 第50-51页 |
3.3 HTNV 特异性单克隆抗体与 HTNV NP 合成肽的反应谱 | 第51-52页 |
4 讨论 | 第52-58页 |
实验二 竞争 ELISA 证明患者血清抗体与合成肽反应的特异性 | 第58-66页 |
1 材料 | 第58页 |
2 方法 | 第58页 |
3 结果 | 第58-63页 |
3.1 滴定实验 | 第58-59页 |
3.2 竞争 ELISA 预实验 | 第59-61页 |
3.3 竞争 ELISA 实验 | 第61-63页 |
4 讨论 | 第63-66页 |
实验三 HTNV 核蛋白抗原肽特异性血清 IgG 在急性期的动态变化 | 第66-72页 |
1 材料 | 第66页 |
2 方法 | 第66-67页 |
3 结果 | 第67-70页 |
3.1 终点滴定法确定 HFRS 患者血清抗原肽特异性 IgG 滴度 | 第67-68页 |
3.2 HFRS 患者不同时间点血清抗原肽特异性 IgG 变化 | 第68-70页 |
4 讨论 | 第70-72页 |
第二部分 鼠源性 HTNV 中和抗体 3D8 识别线性 B 细胞表位 | 第72-97页 |
实验一 鼠源性中和抗体 3D8 识别 HTNV 糖蛋白线性 B 细胞表位的鉴定 | 第73-87页 |
1 材料 | 第73-74页 |
2 方法 | 第74-75页 |
2.1 合成肽的溶解和分装 | 第74页 |
2.2 间接 ELISA 行 PepScan 法 B 细胞表位作图 | 第74页 |
2.3 竞争实验证明抗体-抗原肽结合的特异性 | 第74-75页 |
2.4 点杂交法行 PepScan 法 B 细胞表位作图 | 第75页 |
3 结果 | 第75-81页 |
3.1 PepScan 法筛选含有阳性 B 细胞表位的混合肽 | 第75-76页 |
3.2 PepScan 法筛选含有 B 细胞表位的单条肽 | 第76-77页 |
3.3 竞争实验进一步证实单克隆抗体结合单条肽的特异性 | 第77-79页 |
3.4 阳性反应肽临近肽与单克隆抗体的反应性 | 第79页 |
3.5 竞争 ELISA 证实单克隆抗体 3D8 与 G221 结合的特异性 | 第79-80页 |
3.6 硝酸纤维素(NC)膜包被混合肽行 PepScan 法 B 细胞表位作图 | 第80-81页 |
3.7 NC 膜包被单个 HTNV GP 合成肽行 PepScan 法 B 细胞表位作图 | 第81页 |
4 讨论 | 第81-87页 |
实验二 鼠源性中和抗体 3D8 识别 HTNV 糖蛋白线性 B 细胞表位的精细作图 | 第87-93页 |
1 材料 | 第87-89页 |
2 方法 | 第89页 |
2.1 iELISA 法检测单克隆抗体 3D8 与 G221 周围肽的反应性 | 第89页 |
2.2 点杂交法观察单克隆抗体 3D8 与 G221 周围肽的反应性 | 第89页 |
2.3 ECL-ELISA 法观察单克隆抗体 3D8 与 G221 周围肽的反应性 | 第89页 |
3 结果 | 第89-90页 |
4 讨论 | 第90-93页 |
实验三 丙氨酸扫描突变分析鼠源性中和抗体3D8识别的线性B细胞表位关键氨基酸残基 | 第93-97页 |
1 材料 | 第93页 |
2 方法 | 第93页 |
2.1 iELSA 法观察单克隆抗体 3D8 与丙氨酸替换肽的反应性 | 第93页 |
2.2 点杂交法观察单克隆抗体 3D8 与丙氨酸替换肽的反应性 | 第93页 |
2.3 ECL-ELISA 法观察单克隆抗体 3D8 与丙氨酸替换肽的反应性 | 第93页 |
3 结果 | 第93-95页 |
4 讨论 | 第95-97页 |
小结 | 第97-98页 |
参考文献 | 第98-114页 |
个人简历和研究成果 | 第114-115页 |
致谢 | 第115页 |