| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第9-14页 |
| 文献综述 第一章 AMH的研究进展 | 第14-24页 |
| 1 AMH的发现与命名 | 第14页 |
| 2 AMH的结构与基因 | 第14页 |
| 3 AMH的表达与分布 | 第14-15页 |
| 3.1 AMH在雄性动物中的表达 | 第14-15页 |
| 3.2 AMH在雌性动物中的表达 | 第15页 |
| 4 AMH受体 | 第15-16页 |
| 5 AMH在生殖调控中的功能及基因调控 | 第16-19页 |
| 5.1 AMH在缪勒氏管发育进程中的作用 | 第16页 |
| 5.2 AMH对卵泡发育的作用 | 第16-18页 |
| 5.2.1 AMH抑制原始卵泡的募集 | 第16-17页 |
| 5.2.2 AMH抑制有腔卵泡对FSH的敏感性 | 第17-18页 |
| 5.3 AMH与类固醇激素的关系 | 第18页 |
| 5.4 AMH与卵母细胞 | 第18-19页 |
| 5.5 AMH的基因调控 | 第19页 |
| 6 AMH的影响因素 | 第19-20页 |
| 6.1 月经周期 | 第19页 |
| 6.2 避孕的外源性激素 | 第19-20页 |
| 6.3 动物年龄 | 第20页 |
| 7 AMH的临床应用 | 第20-22页 |
| 7.1 AMH在判断卵巢储备上的应用 | 第20-21页 |
| 7.2 AMH在判断卵巢年龄及最佳生育阶段的应用 | 第21页 |
| 7.3 AMH在疾病诊疗上的应用 | 第21-22页 |
| 7.4 AMH在人类辅助生殖上的应用 | 第22页 |
| 8 AMH研究中存在的问题和展望 | 第22-24页 |
| 第二章 AMH及其受体（AMHR2）在猪体内的表达模式 | 第24-32页 |
| 引言 | 第24页 |
| 1 材料和方法 | 第24-27页 |
| 1.1 材料 | 第24-25页 |
| 1.1.1 试验样品 | 第24页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第25页 |
| 1.1.4 主要耗材 | 第25页 |
| 1.2 方法 | 第25-27页 |
| 1.2.1 RNA提取 | 第25页 |
| 1.2.2 卵泡液的收集 | 第25页 |
| 1.2.3 颗粒细胞的分离 | 第25-26页 |
| 1.2.4 cDNA制备 | 第26页 |
| 1.2.5 引物设计 | 第26页 |
| 1.2.6 实时荧光定量PCR (Real-time PCR) | 第26-27页 |
| 1.2.7 AMH浓度检测 | 第27页 |
| 2 统计学分析 | 第27-28页 |
| 3 试验结果 | 第28-30页 |
| 3.1 猪各器官总RAN提取质量检测 | 第28页 |
| 3.2 AMH及AMHR2在猪各器官上的表达情况 | 第28-29页 |
| 3.3 猪卵巢上不同直径卵泡颗粒细胞总RNA提取质量检测 | 第29页 |
| 3.4 AMH及AMHR2在猪不同直径卵泡颗粒细胞上的表达情况 | 第29页 |
| 3.5 猪卵巢不同直径卵泡液中AMH浓度 | 第29-30页 |
| 4 小结与讨论 | 第30-32页 |
| 4.1 AMH及AMHR2主要在猪性腺中表达 | 第30页 |
| 4.2 AMH及AMHR2在猪卵巢中的mRNA水平 | 第30-32页 |
| 4.2.1 AMH及AMHR2在猪卵巢颗粒细胞上的表达 | 第30-31页 |
| 4.2.2 AMH在猪卵巢卵泡液中的浓度 | 第31-32页 |
| 第三章 猪卵巢卵泡膜细胞的分离纯化和培养 | 第32-42页 |
| 引言 | 第32页 |
| 1 材料和方法 | 第32-36页 |
| 1.1 材料 | 第32-34页 |
| 1.1.1 试验样品 | 第32页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第32-33页 |
| 1.1.3 主要抗体 | 第33页 |
| 1.1.4 主要试验仪器 | 第33页 |
| 1.1.5 主要耗材 | 第33页 |
| 1.1.6 主要试剂配制 | 第33-34页 |
| 1.2 试验方法 | 第34-36页 |
| 1.2.1 猪卵巢卵泡膜细胞的分离纯化 | 第34-36页 |
| 1.2.1.1 三种方法分离猪卵巢卵泡膜细胞 | 第34-35页 |
| 1.2.1.2 卵泡膜细胞密度及活力检测 | 第35-36页 |
| 1.2.1.3 细胞免疫荧光染色 | 第36页 |
| 1.2.1.4 流式细胞仪纯度鉴定 | 第36页 |
| 1.2.1.5 CCK-8 法测细胞生长曲线 | 第36页 |
| 1.2.2 对纯度最高的卵泡膜细胞进行培养并观察其生长状态 | 第36页 |
| 2 统计学分析 | 第36-37页 |
| 3 试验结果 | 第37-40页 |
| 3.1 猪卵泡膜细胞鉴定结果 | 第37页 |
| 3.2 流式细胞仪纯度鉴定结果 | 第37-38页 |
| 3.3 三种方法获取细胞数量、存活率、试验耗时和纯度的比较 | 第38-39页 |
| 3.4 卵泡膜细胞生长曲线 | 第39页 |
| 3.5 分析得到纯度最高的方法A获得的卵泡膜细胞的形态学 | 第39-40页 |
| 4 分析与讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 AMH在卵泡膜细胞上功能的研究 | 第42-54页 |
| 引言 | 第42-43页 |
| 1 材料和方法 | 第43-46页 |
| 1.1 材料 | 第43页 |
| 1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 1.3 主要仪器及耗材 | 第43页 |
| 1.4 相关试剂的配制 | 第43页 |
| 1.5 试验设计 | 第43-44页 |
| 1.5.1 试验一：猪卵巢卵泡膜细胞上AMHR2的检测 | 第43页 |
| 1.5.2 试验二：FSH和AMH对猪卵巢卵泡膜细胞类固醇生成相关基因的调控 | 第43页 |
| 1.5.3 试验三：LH和AMH对猪卵巢卵泡膜细胞类固醇生成相关基因的调控 | 第43-44页 |
| 1.5.4 试验四：Forskolin和AMH对猪卵泡膜细胞类固醇生成相关基因的调控 | 第44页 |
| 1.5.5 试验五：猪卵泡膜细胞敲低AMHR2后LH和AMH添加对类固醇合成酶相关基因的调控 | 第44页 |
| 1.6 方法 | 第44-46页 |
| 1.6.1 猪卵泡膜细胞总RNA的提取及cDNA的制备 | 第44页 |
| 1.6.2 普通PCR | 第44-45页 |
| 1.6.2 荧光标记的siAMHR2的溶解和保存 | 第45页 |
| 1.6.2.1 siRNA设计 | 第45页 |
| 1.6.2.2 siRNA溶解与保存 | 第45页 |
| 1.6.3 筛选最优siAMHR2序列 | 第45-46页 |
| 1.6.4 引物设计 | 第46页 |
| 2 统计学分析 | 第46-47页 |
| 3 试验结果 | 第47-52页 |
| 3.1 猪卵泡膜细胞中AMHR2的表达 | 第47页 |
| 3.2 FSH和AMH对膜细胞内LHCGR、STAR以及类固醇激素合成酶表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.3 LH、AMH对卵泡膜细胞内LHCGR、STAR以及类固醇激素生成酶表达的影响 | 第48-49页 |
| 3.4 Forskolin和AMH单独或共同作用对卵泡膜细胞LHCGR、STAR以及类固醇激素生成酶mRNA的影响 | 第49-50页 |
| 3.5 si AMHR2最优序列筛选 | 第50-51页 |
| 3.6 敲低AMHR2后LH和AMH单独或共同作用对LHCGR、STAR以及卵泡膜细胞类固醇激素生成酶mRNA的影响 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 个人简历 | 第64-65页 |
