| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 1 引言 | 第8-18页 |
| 1.1 转Bt基因水稻(Oryza sativa L.)研究 | 第8-10页 |
| 1.1.1 Bt杀虫蛋白 | 第8页 |
| 1.1.2 转Bt基因水稻 | 第8-10页 |
| 1.2 水稻致敏性研究 | 第10-13页 |
| 1.2.1 致敏的发生 | 第10-11页 |
| 1.2.2 致敏原的类别 | 第11-12页 |
| 1.2.3 水稻内源性致敏原 | 第12-13页 |
| 1.3 转基因作物的致敏性安全评价 | 第13-16页 |
| 1.3.1 外源蛋白的致敏性评价 | 第13-15页 |
| 1.3.2 对内源性致敏原的非预期效应 | 第15-16页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第16-17页 |
| 1.5 技术路线 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-28页 |
| 2.1 仪器与试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2.2 水稻内源性致敏原的生物信息学筛选与分析 | 第19-20页 |
| 2.2.1 水稻蛋白序列的获得 | 第19页 |
| 2.2.2 致敏原蛋白序列的获得 | 第19页 |
| 2.2.3 水稻潜在交叉反应性致敏原的筛选 | 第19页 |
| 2.2.4 水稻致敏原序列的保守结构域分析 | 第19-20页 |
| 2.2.5 GO(Gene Ontology)功能注释分析 | 第20页 |
| 2.2.6 水稻致敏原系统发育分析 | 第20页 |
| 2.2.7 水稻致敏原染色体分布分析 | 第20页 |
| 2.3 转Bt基因与非转基因水稻种子的比较蛋白组学研究 | 第20-26页 |
| 2.3.1 植物材料的保存和预处理 | 第20页 |
| 2.3.2 水稻种子基因组DNA的提取 | 第20页 |
| 2.3.3 转基因成分的PCR检测 | 第20-21页 |
| 2.3.4 水稻种子总蛋白的提取 | 第21-22页 |
| 2.3.5 蛋白浓度的测定及得率计算 | 第22页 |
| 2.3.6 单向聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳 | 第22-23页 |
| 2.3.7 凝胶染色与扫描 | 第23页 |
| 2.3.8 蛋白质双向电泳 | 第23-24页 |
| 2.3.9 双向电泳胶图分析 | 第24-25页 |
| 2.3.10 差异蛋白点的质谱鉴定 | 第25-26页 |
| 2.3.11 差异蛋白的生物信息学分析 | 第26页 |
| 2.4 转Bt基因与非转基因水稻种子蛋白免疫印迹研究 | 第26-28页 |
| 2.4.1 半干转移系统转印蛋白质 | 第26页 |
| 2.4.2 免疫检测 | 第26-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-54页 |
| 3.1 水稻内源性致敏原的筛选与分析 | 第28-38页 |
| 3.1.1 水稻潜在致敏原的筛选 | 第28页 |
| 3.1.2 水稻致敏原的蛋白家族分布 | 第28-35页 |
| 3.1.3 水稻致敏原的功能分类 | 第35-36页 |
| 3.1.4 水稻致敏原的系统发育分析 | 第36-38页 |
| 3.1.5 水稻致敏原在染色体上的分布 | 第38页 |
| 3.2 水稻种子蛋白双向电泳条件的确定 | 第38-42页 |
| 3.2.1 不同蛋白提取方法的比较分析 | 第38-40页 |
| 3.2.2 不同pH梯度IPG胶条双向电泳结果比较 | 第40-41页 |
| 3.2.3 不同蛋白上样量的双向电泳结果比较 | 第41-42页 |
| 3.3 水稻种子差异蛋白点的鉴定与分析 | 第42-52页 |
| 3.3.1 转基因材料的验证 | 第42-44页 |
| 3.3.2 水稻种子蛋白图谱比较分析 | 第44页 |
| 3.3.3 差异蛋白点的质谱鉴定 | 第44-50页 |
| 3.3.4 表达差异蛋白点的生物信息学分析 | 第50页 |
| 3.3.5 内源性致敏原分析 | 第50-52页 |
| 3.4 水稻种子蛋白的血清学筛选 | 第52-54页 |
| 4 讨论 | 第54-58页 |
| 4.1 水稻潜在致敏原的保守性与多样性 | 第54-55页 |
| 4.2 不同蛋白提取方法和双向电泳条件的选择 | 第55-56页 |
| 4.3 转Bt基因水稻的非预期效应 | 第56-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
