| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 引言 | 第8-10页 |
| 第一章 实验材料 | 第10-15页 |
| 1.1 细胞 | 第10页 |
| 1.2 病毒 | 第10页 |
| 1.3 主要实验仪器设备 | 第10-11页 |
| 1.4 主要实验试剂来源及配制方法 | 第11-15页 |
| 1.4.1 主要实验试剂来源 | 第11-12页 |
| 1.4.2 主要实验试剂配制方法 | 第12-15页 |
| 第二章 试验方法 | 第15-27页 |
| 2.1 细胞培养 | 第15-17页 |
| 2.1.1 细胞复苏 | 第15页 |
| 2.1.2 细胞传代 | 第15-16页 |
| 2.1.3 换液 | 第16页 |
| 2.1.4 细胞冻存 | 第16-17页 |
| 2.1.5 HELF细胞、U251细胞、原代神经胶质瘤细胞各阶段所用培养液 | 第17页 |
| 2.2 人巨细胞病毒的制备、保存和定量 | 第17-18页 |
| 2.2.1 人巨细胞病毒AD169毒株的制备 | 第17-18页 |
| 2.2.2 人巨细胞病毒感染滴度的确定（空斑定量法） | 第18页 |
| 2.3 HCMV AD169感染HELF、U251、原代神经胶质瘤细胞的方法 | 第18-19页 |
| 2.4 免疫荧光染色观察HCMV IE2、ATF5、CD133和Nestin在HCMV感染后的胶质瘤细胞中的表达变化 | 第19页 |
| 2.5 qPCR检测HCMV感染对U251、原代神经胶质瘤细胞中的HCMV IE2、ATF5、CD133和Notch1基因表达的影响 | 第19-22页 |
| 2.5.1 引物设计与合成 | 第19-20页 |
| 2.5.2 U251、原代神经胶质瘤细胞处理 | 第20页 |
| 2.5.3 U251、原代神经胶质瘤细胞总RNA提取 | 第20-21页 |
| 2.5.4 U251、原代神经胶质瘤细胞提取的总RNA反转录为cDNA | 第21-22页 |
| 2.5.5 qPCR扩增目的基因 | 第22页 |
| 2.6 Western-blot检测HCMV感染对胶质瘤细胞中的HCMV IE2、ATF5、CD133和NICD蛋白表达的影响 | 第22-25页 |
| 2.6.1 U251、原代神经胶质瘤细胞的预先处理 | 第22页 |
| 2.6.2 细胞总蛋白提取的方法 | 第22-23页 |
| 2.6.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE电泳） | 第23页 |
| 2.6.4 转膜（湿转法） | 第23-24页 |
| 2.6.5 免疫反应检测蛋白表达 | 第24页 |
| 2.6.6 化学发光及图像采集 | 第24页 |
| 2.6.7 凝胶图像分析 | 第24-25页 |
| 2.7 慢病毒下调胶质瘤细胞ATF5的内源性表达 | 第25页 |
| 2.7.1 筛选和优化慢病毒感染条件 | 第25页 |
| 2.7.2 胶质瘤细胞中ATF5干扰效率的检测 | 第25页 |
| 2.8 CCK8实验检测HCMV感染对胶质瘤细胞增殖能力的影响 | 第25-26页 |
| 2.9 克隆形成实验检测HCMV感染对胶质瘤克隆形成能力的影响 | 第26页 |
| 2.10 统计学分析 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与分析 | 第27-40页 |
| 3.1 细胞培养 | 第27-28页 |
| 3.1.1 HELF细胞的培养 | 第27页 |
| 3.1.2 原代神经胶质瘤细胞分离培养 | 第27-28页 |
| 3.1.3 神经胶质瘤U251细胞的培养 | 第28页 |
| 3.2 HCMV AD169毒株滴度确定及扩增 | 第28-29页 |
| 3.2.1 HCMV AD169毒株滴度确定 | 第28页 |
| 3.2.2 HCMV AD169病毒的扩增 | 第28-29页 |
| 3.3 免疫荧光染色观察胶质瘤在HCMV AD169感染后的不同时间点HCMV IE2、ATF5、CD133、Nestin的表达变化 | 第29-31页 |
| 3.3.1 U251细胞在HCMV AD169感染 0、24、48、72h后IE2、ATF5、CD133、Nestin的表达 | 第29-30页 |
| 3.3.2 原代神经胶质瘤细胞在HCMV AD169感染 0、24、48、72h后IE2、ATF5、CD133、Nestin的表达 | 第30-31页 |
| 3.4 HCMV AD169感染对胶质瘤细胞中的HCMV IE2、ATF5、CD133和Notch1（NICD）表达的影响 | 第31-33页 |
| 3.4.1 qPCR检测HCMV AD169感染对胶质瘤细胞中的HCMV IE2、ATF5、CD133和Notch1基因表达的影响 | 第31-32页 |
| 3.4.2 Western-blot检测HCMV感染对胶质瘤细胞中的HCMV IE2、ATF5、CD133及NICD蛋白表达的影响 | 第32-33页 |
| 3.5 慢病毒下调ATF5表达效果的检验 | 第33-35页 |
| 3.5.1 慢病毒感染U251和原代神经胶质瘤细胞效率的检测 | 第33-34页 |
| 3.5.2 Western-blot检测慢病毒干扰ATF5表达的效率 | 第34-35页 |
| 3.6 HCMV AD169感染对下调ATF5的胶质瘤细胞中的HCMV IE2、ATF5、CD133和Notch1（NICD）表达的影响 | 第35-37页 |
| 3.6.1 qPCR检测HCMV感染对下调ATF5的胶质瘤细胞中的HCMV IE2、ATF5、CD133和Notch1基因表达的影响 | 第35-36页 |
| 3.6.2 Western-blot检测HCMV感染对下调ATF5的胶质瘤细胞中的HCMV IE2、ATF5、CD133及NICD蛋白表达的影响 | 第36-37页 |
| 3.7 CCK8实验检测HCMV感染对胶质瘤细胞增殖能力的影响 | 第37-39页 |
| 3.8 克隆形成实验检测HCMV感染对胶质瘤克隆形成能力的影响 | 第39-40页 |
| 第四章 讨论 | 第40-43页 |
| 第五章 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 综述 | 第47-55页 |
| 一、人巨细胞病毒概述 | 第47-48页 |
| 二、人巨细胞病毒感染与肿瘤的关系 | 第48-49页 |
| 三、胶质瘤与胶质瘤干细胞概述 | 第49-50页 |
| 四、展望 | 第50-51页 |
| 综述参考文献 | 第51-55页 |
| 攻读学位期间研究成果 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
