| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-34页 |
| 1.1 小麦条锈病概况 | 第16-19页 |
| 1.1.1 小麦条锈病的危害 | 第16-17页 |
| 1.1.2 小麦条锈病的生物学特性及流行规律 | 第17-18页 |
| 1.1.3 小麦条锈菌侵染过程与致病机理研究 | 第18-19页 |
| 1.2 小麦品种抗性及病原菌变异 | 第19-21页 |
| 1.2.1 小麦条锈菌变异 | 第19-20页 |
| 1.2.2 小麦品种抗病性丧失 | 第20-21页 |
| 1.3 植物对病原菌的免疫机理 | 第21-22页 |
| 1.4 真菌MAPK信号通路进展研究 | 第22-29页 |
| 1.4.1 酵母MAPK信号途径 | 第23-25页 |
| 1.4.2 植物病原真菌FUS3/KSS1途径 | 第25-29页 |
| 1.5 RNAi介导的基因沉默 | 第29-32页 |
| 1.5.1 小干涉RNA（si RNA）的来源 | 第29-30页 |
| 1.5.2 siRNA沉默复合体的形成 | 第30页 |
| 1.5.3 siRNA对下游基因调节 | 第30-31页 |
| 1.5.4 RNAi在农作物改良种的应用 | 第31-32页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第32-34页 |
| 第二章 小麦条锈菌MAPK信号通路基因鉴定 | 第34-50页 |
| 2.1 引言 | 第34页 |
| 2.2 试验材料 | 第34-36页 |
| 2.2.1 植物材料 | 第34-35页 |
| 2.2.2 菌株 | 第35页 |
| 2.2.3 质粒载体 | 第35页 |
| 2.2.4 分子生物学试剂 | 第35页 |
| 2.2.5 主要仪器 | 第35-36页 |
| 2.3 方法 | 第36-43页 |
| 2.3.1 小麦条锈菌的繁殖与收集 | 第36页 |
| 2.3.2 小麦条锈菌夏孢子萌发与样品采集 | 第36页 |
| 2.3.3 小麦条锈菌夏孢子及接种条锈菌叶片总RNA的提取及纯化 | 第36-37页 |
| 2.3.4 生物信息学分析小麦条锈菌MAPK候选基因 | 第37页 |
| 2.3.5 MAPK信号通路候选基因的克隆 | 第37-39页 |
| 2.3.6 Real-time PCR分析 | 第39页 |
| 2.3.7 酵母转化 | 第39-40页 |
| 2.3.8 病毒介导的基因沉默实验 | 第40-43页 |
| 2.4 结果 | 第43-48页 |
| 2.4.1 小麦条锈菌基因组中MAPK候选基因的鉴定及克隆 | 第43-44页 |
| 2.4.2 小麦条锈菌MAPK候选激酶基因的转录表达水平特征分析 | 第44-45页 |
| 2.4.3 酵母双杂验证MAPK候选基因之间互作 | 第45-46页 |
| 2.4.4 VIGS沉默实验 | 第46-48页 |
| 2.5 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 小麦条锈菌关键激酶基因PsKPP4及PsKPP6功能分析 | 第50-74页 |
| 3.1 引言 | 第50页 |
| 3.2 试验材料 | 第50-51页 |
| 3.2.1 植物材料 | 第50页 |
| 3.2.2 菌株 | 第50-51页 |
| 3.2.3 质粒载体 | 第51页 |
| 3.2.4 分子生物学试剂 | 第51页 |
| 3.3 方法 | 第51-62页 |
| 3.3.1 小麦条锈菌的培养 | 第51页 |
| 3.3.2 小麦条锈菌夏孢子萌发与样品采集 | 第51页 |
| 3.3.3 小麦条锈菌夏孢子及接种条锈菌叶片总RNA的提取及纯化 | 第51页 |
| 3.3.4 生物信息学分析小麦条锈菌关键激酶基因 | 第51页 |
| 3.3.5 酵母转化 | 第51页 |
| 3.3.6 酵母过表达 | 第51-52页 |
| 3.3.7 抑制剂处理 | 第52页 |
| 3.3.8 稻瘟突变体互补 | 第52-57页 |
| 3.3.9 Western blotting | 第57-58页 |
| 3.3.10 小麦条锈菌组织学处理 | 第58-59页 |
| 3.3.11 原生质体定位 | 第59-60页 |
| 3.3.12 农杆菌介导的PVX诱导表达 | 第60-62页 |
| 3.4 结果 | 第62-71页 |
| 3.4.1 PsKPP4和PsKPP6的蛋白结构分析 | 第62-63页 |
| 3.4.2 保守位点功能分析 | 第63页 |
| 3.4.3 裂殖酵母中过表达激酶基因 | 第63-65页 |
| 3.4.4 抑制剂处理实验 | 第65页 |
| 3.4.5 稻瘟突变体互补实验 | 第65-67页 |
| 3.4.6 酵母双杂交验证 SAM 结构域功能 | 第67页 |
| 3.4.7 农杆菌介导的诱导表达 | 第67-68页 |
| 3.4.8 VIGS沉默实验 | 第68-71页 |
| 3.5 讨论 | 第71-74页 |
| 第四章 小麦条锈菌基因PsPRF1功能分析 | 第74-85页 |
| 4.1 引言 | 第74页 |
| 4.2 试验材料 | 第74-75页 |
| 4.2.1 植物材料 | 第74页 |
| 4.2.2 菌株 | 第74-75页 |
| 4.2.3 质粒载体 | 第75页 |
| 4.2.4 分子生物学试剂 | 第75页 |
| 4.3 方法 | 第75-77页 |
| 4.3.1 小麦条锈菌的培养 | 第75页 |
| 4.3.2 原生质体定位 | 第75页 |
| 4.3.3 酵母过表达 | 第75页 |
| 4.3.4 病毒介导的基因沉默实验 | 第75页 |
| 4.3.5 农杆菌介导的PVX病毒诱导表达 | 第75页 |
| 4.3.6 同位素检测小片段 | 第75-77页 |
| 4.3.7 蛋白表达及纯化 | 第77页 |
| 4.4 结果 | 第77-84页 |
| 4.4.1 PsPRF1序列分析 | 第77-78页 |
| 4.4.2 亚细胞定位 | 第78-79页 |
| 4.4.3 PsPRF1在酵母中过表达诱导坏死 | 第79-80页 |
| 4.4.4 植物中瞬时表达PsPRF1能引起植物坏死 | 第80页 |
| 4.4.5 PsPRF1蛋白中保守结构域负责诱导坏死 | 第80-81页 |
| 4.4.6 PsPRF1具有核酸酶功能 | 第81-82页 |
| 4.4.7 PsPRF1功能结构域验证 | 第82-83页 |
| 4.4.8 VIGS沉默实验 | 第83-84页 |
| 4.5 讨论 | 第84-85页 |
| 第五章 小麦条锈菌重要激酶基因PsFUZ7的功能分析 | 第85-97页 |
| 5.1 引言 | 第85-86页 |
| 5.2 试验材料 | 第86页 |
| 5.2.1 植物材料 | 第86页 |
| 5.2.2 菌株 | 第86页 |
| 5.2.3 质粒载体 | 第86页 |
| 5.2.4 分子生物学试剂 | 第86页 |
| 5.3 方法 | 第86-87页 |
| 5.3.1 小麦条锈菌的繁殖与收集 | 第86页 |
| 5.3.2 小麦条锈菌夏孢子萌发与样品采集 | 第86页 |
| 5.3.3 小麦条锈菌夏孢子及接种条锈菌叶片总RNA的提取及纯化 | 第86页 |
| 5.3.4 生物信息学分析小麦条锈菌关键激酶基因 | 第86页 |
| 5.3.5 原生质体定位 | 第86页 |
| 5.3.6 酵母转化 | 第86页 |
| 5.3.7 酵母过表达 | 第86页 |
| 5.3.8 抑制剂处理 | 第86-87页 |
| 5.3.9 稻瘟突变体互补 | 第87页 |
| 5.3.10 病毒介导的基因沉默实验 | 第87页 |
| 5.3.11 小麦条锈菌组织学处理 | 第87页 |
| 5.3.12 农杆菌介导的PVX诱导表达 | 第87页 |
| 5.4 结果 | 第87-95页 |
| 5.4.1 PsFUZ7蛋白结构分析 | 第87-88页 |
| 5.4.2 稻瘟突变体互补实验 | 第88-89页 |
| 5.4.3 裂殖酵母中过表达PsFUZ7基因 | 第89-90页 |
| 5.4.4 抑制剂处理实验 | 第90-91页 |
| 5.4.5 VIGS沉默实验 | 第91-95页 |
| 5.5 讨论 | 第95-97页 |
| 第六章 RNAi介导的抗小麦条锈菌基因工程 | 第97-120页 |
| 6.1 引言 | 第97-98页 |
| 6.2 试验材料 | 第98页 |
| 6.2.1 植物材料、菌株及质粒载体 | 第98页 |
| 6.2.2 常用试剂 | 第98页 |
| 6.2.3 主要仪器 | 第98页 |
| 6.3 方法 | 第98-109页 |
| 6.3.1 PsFUZ7干涉载体的构建 | 第98页 |
| 6.3.2 基因枪介导法转化小麦 | 第98-102页 |
| 6.3.3 对转基因小麦后代阳性植株的分子检测 | 第102-103页 |
| 6.3.4 Northern blot | 第103-106页 |
| 6.3.5 Southern blot | 第106-107页 |
| 6.3.6 生物量检测 | 第107-108页 |
| 6.3.7 透射样品的制备 | 第108-109页 |
| 6.3.8 WGA-Alexa 488 荧光染色 | 第109页 |
| 6.3.9 条锈菌的沉默效率检测 | 第109页 |
| 6.4 结果 | 第109-118页 |
| 6.4.1 pAHC25-PsFUZ7干涉载体的构建 | 第109-110页 |
| 6.4.2 T0代转基因植株的PCR检测 | 第110-111页 |
| 6.4.3 筛选出的L65和L91株系T3代分子鉴定 | 第111-112页 |
| 6.4.4 T2代转基因小麦室内生物学抗病性鉴定 | 第112页 |
| 6.4.5 L65和L91株系T3代的室内抗病性鉴定及分子生物学分析 | 第112-115页 |
| 6.4.6 小麦条锈菌接种于L65和L91株系后的细胞组织学观察 | 第115-116页 |
| 6.4.7 小麦条锈菌MAPK通路基因及小麦抗病蛋白的转录水平表达 | 第116-117页 |
| 6.4.8 小麦条锈菌与小麦之间“分子对话” | 第117-118页 |
| 6.5 讨论 | 第118-120页 |
| 第七章 全文的总结和展望 | 第120-121页 |
| 参考文献 | 第121-132页 |
| 附录 | 第132-138页 |
| 致谢 | 第138-139页 |
| 个人简介 | 第139页 |
