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Stk40对脂肪和骨骼肌分化的调控及机制的研究

中文摘要第5-7页
ABSTRACT第7-8页
符号说明第12-14页
1 引言第14-29页
    1.1 Stk40背景介绍第14-17页
        1.1.1 Stk40在胚胎干细胞分化中的作用第15页
        1.1.2 Stk40在小鼠胚胎发育中的作用第15-17页
    1.2 脂肪细胞分化的研究第17-23页
        1.2.1 脂肪细胞体内发育过程的研究第18-20页
        1.2.2 脂肪细胞分化过程中的机制研究第20-23页
    1.3 骨骼肌细胞分化的研究第23-29页
        1.3.1 骨骼肌细胞体内发育和再生过程的研究第23-25页
        1.3.2 骨骼肌成肌过程中机制的研究第25-29页
2 实验材料和方法第29-45页
    2.1 实验材料第29-34页
        2.1.1 实验动物和哺乳动物细胞第29页
        2.1.2 细菌菌株第29页
        2.1.3 质粒第29-30页
        2.1.4 主要试剂第30-33页
        2.1.5 实验仪器第33-34页
    2.2 实验方法第34-45页
        2.2.1 质粒构建第34-35页
        2.2.2 细胞培养,冻存和复苏第35页
        2.2.3 细胞分化第35-36页
        2.2.4 病毒包装和感染第36-37页
        2.2.5 RNA提取与反转录第37页
        2.2.6 荧光实时定量PCR第37-40页
        2.2.7 细胞和组织总蛋白提取与定量第40页
        2.2.8 免疫印迹(Western blotting)第40-41页
        2.2.9 免疫组化染色(Immunohistochemical staining)第41页
        2.2.10 免疫荧光染色(Immunofluorescent staining)第41-42页
        2.2.11 油红染色(Oil Red O staining,ORO staining)第42页
        2.2.12 Stk40基因敲除小鼠基因组DNA提取与基因型鉴定第42-43页
        2.2.13 流式细胞分选第43页
        2.2.14 双荧光素报告实验第43页
        2.2.15 核质分离实验第43-44页
        2.2.16 蛋白质降解和半衰期测定第44页
        2.2.17 数据统计第44-45页
3 实验结果第45-85页
    3.1 Stk40在脂肪细胞分化过程中功能和机制的研究第45-62页
        3.1.1 Stk40基因敲除增强了MEFs的成脂分化能力第45-47页
        3.1.2 Stk40表达下调增强了C3H10T1/2 的成脂分化能力第47-49页
        3.1.3 Stk40表达水平下调对 3T3L1的成脂分化没有影响第49-50页
        3.1.4 C/EBPβ对于Stk40~(-/-)MEFs成脂分化能力的增强是必需的第50-53页
        3.1.5 Stk40基因敲除影响C/EBPβ和C/EBPδ的转录后调控第53-56页
        3.1.6 在Stk40 KO和KD细胞中C/EBPs的Cap依赖翻译水平上升第56-62页
    3.2 Stk40在骨骼肌细胞分化中功能和机制的研究第62-85页
        3.2.1 Stk40在骨骼肌细胞分化和再生过程中表达上升第62-64页
        3.2.2 下调Stk40表达水平使C2C12细胞成肌分化能力减弱第64-69页
        3.2.3 Stk40表达下调使MyoD介导的C3H10T1/2 细胞成肌分化能力减弱第69-71页
        3.2.4 过表达Stk40使C2C12的成肌分化能力有一定程度的提高第71-73页
        3.2.5 Stk40表达下调使C2C12分化过程中HDAC5蛋白水平上升第73-78页
        3.2.6 HDAC5介导了Stk40对MyHC表达的影响第78-81页
        3.2.7 Stk40基因敲除影响了小鼠胚胎发育过程中骨骼肌的发育第81-85页
4 讨论第85-91页
    4.1 Stk40在脂肪细胞分化过程中的作用第85-86页
    4.2 Stk40在调控C/EBPs翻译过程中的作用第86-87页
    4.3 Stk40在肌肉细胞分化中的作用第87-89页
    4.4 Stk40在调控HDAC5蛋白水平中的作用第89-91页
5 结论第91-92页
参考文献第92-103页
致谢第103-105页
学术论文和科研成果目录第105页

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