中文摘要 | 第5-7页 |
ABSTRACT | 第7-8页 |
符号说明 | 第12-14页 |
1 引言 | 第14-29页 |
1.1 Stk40背景介绍 | 第14-17页 |
1.1.1 Stk40在胚胎干细胞分化中的作用 | 第15页 |
1.1.2 Stk40在小鼠胚胎发育中的作用 | 第15-17页 |
1.2 脂肪细胞分化的研究 | 第17-23页 |
1.2.1 脂肪细胞体内发育过程的研究 | 第18-20页 |
1.2.2 脂肪细胞分化过程中的机制研究 | 第20-23页 |
1.3 骨骼肌细胞分化的研究 | 第23-29页 |
1.3.1 骨骼肌细胞体内发育和再生过程的研究 | 第23-25页 |
1.3.2 骨骼肌成肌过程中机制的研究 | 第25-29页 |
2 实验材料和方法 | 第29-45页 |
2.1 实验材料 | 第29-34页 |
2.1.1 实验动物和哺乳动物细胞 | 第29页 |
2.1.2 细菌菌株 | 第29页 |
2.1.3 质粒 | 第29-30页 |
2.1.4 主要试剂 | 第30-33页 |
2.1.5 实验仪器 | 第33-34页 |
2.2 实验方法 | 第34-45页 |
2.2.1 质粒构建 | 第34-35页 |
2.2.2 细胞培养,冻存和复苏 | 第35页 |
2.2.3 细胞分化 | 第35-36页 |
2.2.4 病毒包装和感染 | 第36-37页 |
2.2.5 RNA提取与反转录 | 第37页 |
2.2.6 荧光实时定量PCR | 第37-40页 |
2.2.7 细胞和组织总蛋白提取与定量 | 第40页 |
2.2.8 免疫印迹(Western blotting) | 第40-41页 |
2.2.9 免疫组化染色(Immunohistochemical staining) | 第41页 |
2.2.10 免疫荧光染色(Immunofluorescent staining) | 第41-42页 |
2.2.11 油红染色(Oil Red O staining,ORO staining) | 第42页 |
2.2.12 Stk40基因敲除小鼠基因组DNA提取与基因型鉴定 | 第42-43页 |
2.2.13 流式细胞分选 | 第43页 |
2.2.14 双荧光素报告实验 | 第43页 |
2.2.15 核质分离实验 | 第43-44页 |
2.2.16 蛋白质降解和半衰期测定 | 第44页 |
2.2.17 数据统计 | 第44-45页 |
3 实验结果 | 第45-85页 |
3.1 Stk40在脂肪细胞分化过程中功能和机制的研究 | 第45-62页 |
3.1.1 Stk40基因敲除增强了MEFs的成脂分化能力 | 第45-47页 |
3.1.2 Stk40表达下调增强了C3H10T1/2 的成脂分化能力 | 第47-49页 |
3.1.3 Stk40表达水平下调对 3T3L1的成脂分化没有影响 | 第49-50页 |
3.1.4 C/EBPβ对于Stk40~(-/-)MEFs成脂分化能力的增强是必需的 | 第50-53页 |
3.1.5 Stk40基因敲除影响C/EBPβ和C/EBPδ的转录后调控 | 第53-56页 |
3.1.6 在Stk40 KO和KD细胞中C/EBPs的Cap依赖翻译水平上升 | 第56-62页 |
3.2 Stk40在骨骼肌细胞分化中功能和机制的研究 | 第62-85页 |
3.2.1 Stk40在骨骼肌细胞分化和再生过程中表达上升 | 第62-64页 |
3.2.2 下调Stk40表达水平使C2C12细胞成肌分化能力减弱 | 第64-69页 |
3.2.3 Stk40表达下调使MyoD介导的C3H10T1/2 细胞成肌分化能力减弱 | 第69-71页 |
3.2.4 过表达Stk40使C2C12的成肌分化能力有一定程度的提高 | 第71-73页 |
3.2.5 Stk40表达下调使C2C12分化过程中HDAC5蛋白水平上升 | 第73-78页 |
3.2.6 HDAC5介导了Stk40对MyHC表达的影响 | 第78-81页 |
3.2.7 Stk40基因敲除影响了小鼠胚胎发育过程中骨骼肌的发育 | 第81-85页 |
4 讨论 | 第85-91页 |
4.1 Stk40在脂肪细胞分化过程中的作用 | 第85-86页 |
4.2 Stk40在调控C/EBPs翻译过程中的作用 | 第86-87页 |
4.3 Stk40在肌肉细胞分化中的作用 | 第87-89页 |
4.4 Stk40在调控HDAC5蛋白水平中的作用 | 第89-91页 |
5 结论 | 第91-92页 |
参考文献 | 第92-103页 |
致谢 | 第103-105页 |
学术论文和科研成果目录 | 第105页 |