| 摘要 | 第10-11页 |
| ABSTRACT | 第11页 |
| 1 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 植物糖转运蛋白的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.1.1 植物中的糖转运蛋白的种类 | 第12-13页 |
| 1.1.2 糖转运蛋白的结构 | 第13-14页 |
| 1.1.3 植物中糖转运蛋白的功能 | 第14页 |
| 1.2 SWEET糖转运蛋白家族的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.1 SWEET糖转运蛋白的发现 | 第14页 |
| 1.2.2 SWEET蛋白的结构特点 | 第14-15页 |
| 1.2.3 SWEET蛋白的功能 | 第15页 |
| 1.3 农杆菌介导的瞬时表达的相关研究 | 第15-16页 |
| 1.3.1 农杆菌介导的瞬时表达原理 | 第15-16页 |
| 1.3.2 农杆菌介导的瞬时表的应用进展 | 第16页 |
| 1.4 利用农杆菌介导的番茄遗传转化的相关研究 | 第16-18页 |
| 1.4.1 Micro-Tom番茄作为转基因植株的优势 | 第17页 |
| 1.4.2 Micro-Tom番茄遗传转化 | 第17页 |
| 1.4.3 番茄外植体类型及苗龄 | 第17页 |
| 1.4.4 番茄的基因型 | 第17页 |
| 1.4.5 农杆菌的不同菌株类型 | 第17-18页 |
| 1.4.6 外植体的预培养时间 | 第18页 |
| 1.4.7 菌液浓度大小、侵染时间长短以及共培养 | 第18页 |
| 1.4.8 筛选剂 | 第18页 |
| 1.4.9 乙酰丁香酮(AS) | 第18页 |
| 1.4.10 外源基因 | 第18页 |
| 1.5 番茄品质改良的相关研究 | 第18-19页 |
| 1.5.1 增加番茄甜度的转基因相关研究 | 第19页 |
| 1.5.2 增加番茄可溶性固形物含量的转基因研究 | 第19页 |
| 1.6 本研究的目的、内容及意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-33页 |
| 2.1 试验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 质粒和菌株 | 第20页 |
| 2.1.3 培养基及生化试剂 | 第20-22页 |
| 2.1.4 酶制剂 | 第22页 |
| 2.1.5 试剂盒 | 第22页 |
| 2.1.6 实验设备与仪器 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-33页 |
| 2.2.1 SlSWEET11b基因过表达载体构建的基本步骤 | 第22页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第22-23页 |
| 2.2.3 番茄总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.4 RNA反转录成cDNA | 第24-25页 |
| 2.2.5 PCR反应体系及程序 | 第25页 |
| 2.2.6 连接及转化 | 第25页 |
| 2.2.7 挑单克隆 | 第25-26页 |
| 2.2.8 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第26页 |
| 2.2.9 质粒提取 | 第26页 |
| 2.2.10 酶切鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.11 测序 | 第27页 |
| 2.2.12 胶回收 | 第27页 |
| 2.2.13 目的DNA片段与载体相连接 | 第27页 |
| 2.2.14 大肠杆菌DH5α的转化 | 第27-28页 |
| 2.2.15 农杆菌LBA4404转化 | 第28页 |
| 2.2.16 SlSWEET11b沉默载体构建 | 第28页 |
| 2.2.17 TOPO反应 | 第28-29页 |
| 2.2.18 LR反应 | 第29-30页 |
| 2.2.19 利用农杆菌注射番茄果实的瞬时表达 | 第30-31页 |
| 2.2.20 组织培养方法及步骤 | 第31-32页 |
| 2.2.21 转基因阳性植株鉴定 | 第32页 |
| 2.2.22 系统发育树的构建 | 第32-33页 |
| 3 结果与分析 | 第33-47页 |
| 3.1 SlSWEET11b基因的生物信息学分析 | 第33-35页 |
| 3.2 SlSWEET11b基因在番茄中的时空表达特性 | 第35-37页 |
| 3.2.1 SlSWEET11b基因在番茄不同发育时期的表达特性 | 第35页 |
| 3.2.2 SlSWEET11b基因在番茄果实绿果期的表达特性 | 第35-36页 |
| 3.2.3 SlSWEET11b基因在番茄果实转色期的表达特性 | 第36-37页 |
| 3.2.4 SlSWEET11b基因在番茄果实红熟期的表达特性 | 第37页 |
| 3.3 植物表达载体的构建 | 第37-42页 |
| 3.3.1 pBI121-35s-SlSWEET11b基因过表达载体的构建 | 第37-40页 |
| 3.3.2 pB7GWIWG2(I)- TOPO-SlSWEET11b沉默载体的构建 | 第40-42页 |
| 3.4 过表达和沉默的SlSWEET11b基因在番茄果实中的瞬时表达 | 第42-43页 |
| 3.4.1 SlSWEET11b过表达qRT-PCR分析 | 第42页 |
| 3.4.2 SlSWEET11b沉默的qRT-PCR分析 | 第42-43页 |
| 3.5 番茄的遗传转化 | 第43-47页 |
| 3.5.1 预培养 | 第43-44页 |
| 3.5.2 初次筛选愈伤的分化 | 第44页 |
| 3.5.3 进行第二次筛选愈伤的分化 | 第44-45页 |
| 3.5.4 进行第三次愈伤的分化 | 第45页 |
| 3.5.5 生根以及炼苗 | 第45-46页 |
| 3.5.6 番茄转SlSWEET11b基因沉默株系的鉴定 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-48页 |
| 4.1 番茄SlSWEET11b基因组织特异性表达分析 | 第47页 |
| 4.2 影响农杆菌介导番茄遗传转化的因素 | 第47-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-58页 |
| 附录 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
