| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 Rho小G蛋白家族与蛋白酶体复合物间的联系 | 第12-17页 |
| 1.1.1 由泛素化介导的蛋白质蛋白酶体降解过程 | 第12-15页 |
| 1.1.1.1 蛋白质泛素化的过程 | 第12-13页 |
| 1.1.1.2 SCF复合物的结构与功能 | 第13-15页 |
| 1.1.2 Rho小G蛋白家族与蛋白泛素化 | 第15-17页 |
| 1.1.2.1 Rho小G蛋白家族简介 | 第15页 |
| 1.1.2.2 Rho小G蛋白Rif | 第15-16页 |
| 1.1.2.3 RhoE和RhoA可被蛋白酶体降解 | 第16-17页 |
| 1.2 lncRNA在正常细胞及癌细胞中的差异性表达与癌症的关系 | 第17-19页 |
| 1.2.1 lncRNA的概述 | 第17-18页 |
| 1.2.2 lncRNA在癌细胞与正常细胞中的差异性表达 | 第18-19页 |
| 1.2.2.1 lncRNA在癌细胞与正常细胞中差异性表达的基础研究 | 第18页 |
| 1.2.2.2 lncRNA在癌细胞与正常细胞中差异性表达的临床研究 | 第18-19页 |
| 1.3 研究的总体设想 | 第19-22页 |
| 第二章 胃癌细胞中的小G蛋白Rif与泛素化介导的蛋白酶体降解 | 第22-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 细胞材料 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂与药品 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-31页 |
| 2.2.1 细胞培养基配制 | 第23页 |
| 2.2.2 SGC-7901和COS-7的培养 | 第23-24页 |
| 2.2.2.1 细胞复苏 | 第23-24页 |
| 2.2.2.2 细胞传代并铺板 | 第24页 |
| 2.2.3 蛋白质合成抑制剂及蛋白酶体抑制剂实验 | 第24-25页 |
| 2.2.4 质粒及siRNA转染 | 第25-26页 |
| 2.2.5 Western Blot | 第26页 |
| 2.2.6 体内及体外泛素化实验 | 第26-30页 |
| 2.2.7 免疫共沉淀(Co-IP) | 第30-31页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第31-48页 |
| 2.3.1 Rif可以与Cullin1发生相互作用 | 第31-33页 |
| 2.3.1.1 Rif可以与Culliln1免疫共沉淀 | 第31-32页 |
| 2.3.1.2 Rif可以与Culliln1发生细胞内共定位 | 第32-33页 |
| 2.3.2 Rif在蛋白酶体中降解 | 第33-41页 |
| 2.3.2.1 Rif是一个短半衰期蛋白 | 第33-34页 |
| 2.3.2.2 MG132浓度梯度影响p27及Rif蛋白表达 | 第34-36页 |
| 2.3.2.3 MG132时间梯度影响p27及Rif蛋白表达 | 第36-38页 |
| 2.3.2.4 LACT浓度梯度影响p27及Rif蛋白表达 | 第38-39页 |
| 2.3.2.5 LACT时间梯度影响p27及Rif蛋白表达 | 第39-41页 |
| 2.3.3 Rif可能是SCF复合物的底物 | 第41-45页 |
| 2.3.3.1 siRNA沉默Cullin1对Rif表达量的影响 | 第41-42页 |
| 2.3.3.2 Rif的体外泛素化及体内泛素化检测 | 第42-45页 |
| 2.3.4 Rif蛋白影响NEDD8在细胞内的定位 | 第45-46页 |
| 2.3.5 Rif过表达对胃癌细胞p27的影响 | 第46-48页 |
| 2.4 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 正常人类胃上皮细胞系GES-1与人胃癌细胞系MKN45的G1期和S期lncRNA+mRNA表达谱芯片及全局分析 | 第50-89页 |
| 3.1 实验材料 | 第50页 |
| 3.1.1 细胞材料 | 第50页 |
| 3.1.2 主要试剂与药品 | 第50页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第50页 |
| 3.2 实验方法 | 第50-64页 |
| 3.2.1 细胞培养基配制 | 第50-51页 |
| 3.2.2 GES-1和MKN45的培养 | 第51-53页 |
| 3.2.2.1 细胞复苏 | 第51页 |
| 3.2.2.2 细胞传代并铺板 | 第51页 |
| 3.2.2.3 GES-1和MKN45的细胞周期同步化 | 第51-52页 |
| 3.2.2.4 总RNA提取 | 第52-53页 |
| 3.2.3 GES-1和MKN45的细胞同步化及同步化质量检测 | 第53-54页 |
| 3.2.4 GES-1和MKN45的RNA样本质量检测 | 第54页 |
| 3.2.5 GES-1和MKN45的G1期和S期lncRNA+mRNA表达谱芯片 | 第54-59页 |
| 3.2.5.1 总RNA反转录为第一链cDNA | 第54-55页 |
| 3.2.5.2 合成第二链cDNA | 第55-56页 |
| 3.2.5.3 体外转录合成cRNA | 第56页 |
| 3.2.5.4 cRNA反转录 | 第56-57页 |
| 3.2.5.5 荧光标记 | 第57-58页 |
| 3.2.5.6. 芯片杂交 | 第58-59页 |
| 3.2.5.7 芯片的清洗及扫描 | 第59页 |
| 3.2.6 GES-1和MKN45的G1期和S期lncRNA表达谱芯片数据输出及全局分析 | 第59-64页 |
| 3.2.6.1 lncRNA芯片数据的输出 | 第59页 |
| 3.2.6.2 芯片中已知lncRNA类型的区分 | 第59-60页 |
| 3.2.6.3 lncRNA差异性表达分析 | 第60页 |
| 3.2.6.4 qRT-PCR验证 | 第60-62页 |
| 3.2.6.5 lncRNA候选靶基因GO功能注释 | 第62-63页 |
| 3.2.6.6 lncRNA候选靶基因KEGG信号通路注释 | 第63页 |
| 3.2.6.7 lncRNA的结构预测 | 第63-64页 |
| 3.3 结果与分析 | 第64-88页 |
| 3.3.1 GES-1与MKN45细胞同步化质量检测 | 第64-67页 |
| 3.3.2 GES-1和MKN45的RNA样本质量检测 | 第67-68页 |
| 3.3.3 GES-1与MKN45的G1期和S期lncRNA+mRNA表达谱芯片及全局分析 | 第68-87页 |
| 3.3.3.1 lncRNA+mRNA芯片的数据输出统计结果 | 第69-72页 |
| 3.3.3.2 芯片中已知lncRNA类型的区分结果 | 第72-74页 |
| 3.3.3.3 lncRNA差异性表达分析结果 | 第74-76页 |
| 3.3.3.4 lncRNA候选靶基因GO功能注释结果 | 第76-82页 |
| 3.3.3.5 lncRNA候选靶基因KEGG信号通路注释结果 | 第82-85页 |
| 3.3.3.6 部分lncRNA结构预测分析 | 第85-87页 |
| 3.3.4 qPCR验证结果 | 第87-88页 |
| 3.4 讨论 | 第88-89页 |
| 结论 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 附录 | 第100-125页 |
