伏马菌素免疫及化学检测和黄曲霉菌特异抗体表达分析
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 伏马菌素 | 第12-16页 |
| 1.1.1 伏马菌素的发现及危害 | 第12-13页 |
| 1.1.2 伏马菌素生物合成相关基因 | 第13页 |
| 1.1.3 伏马菌素的毒理研究 | 第13-14页 |
| 1.1.4 伏马菌素的检测 | 第14-15页 |
| 1.1.5 伏马菌素脱毒研究 | 第15-16页 |
| 1.1.5.1 控制毒素产生 | 第15页 |
| 1.1.5.2 污染物脱毒处理 | 第15-16页 |
| 1.1.5.3 毒素生物降解 | 第16页 |
| 1.2 黄曲霉菌及黄曲霉毒素 | 第16-18页 |
| 1.2.1 黄曲霉菌特点及危害 | 第16-17页 |
| 1.2.2 黄曲霉菌和黄曲霉毒素的检测方法 | 第17-18页 |
| 1.3 抗体基因工程技术 | 第18-22页 |
| 1.3.1 抗体的特点及发展 | 第18页 |
| 1.3.2 抗菌肽 | 第18-19页 |
| 1.3.3 抗体融合蛋白 | 第19-20页 |
| 1.3.4 蛋白表达系统 | 第20-21页 |
| 1.3.4.1 原核表达系统 | 第20-21页 |
| 1.3.4.2 真核表达系统 | 第21页 |
| 1.3.5 抗体介导植物抗病性研究 | 第21-22页 |
| 1.4 研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 2 实验材料与方法 | 第23-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 菌株及玉米、拟南芥材料 | 第23页 |
| 2.1.2 酶与试剂 | 第23-25页 |
| 2.1.2.1 酶及试剂盒 | 第23-24页 |
| 2.1.2.2 真菌基因组DNA提取试剂 | 第24页 |
| 2.1.2.3 真菌及拟南芥培养基 | 第24页 |
| 2.1.2.4 毒素提取相关试剂 | 第24页 |
| 2.1.2.5 蛋白表达培养基及纯化相关试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.2.6 SDS-PAGE相关溶液配制 | 第25页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-34页 |
| 2.2.1 菌株鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.1.1 菌株的活化培养 | 第26页 |
| 2.2.1.2 真菌基因组DNA提取 | 第26-27页 |
| 2.2.1.3 菌株分子鉴定 | 第27页 |
| 2.2.2 产毒菌培养 | 第27页 |
| 2.2.2.1 孢子收集 | 第27页 |
| 2.2.2.2 产毒菌培养 | 第27页 |
| 2.2.3 LC-MS/MS测定毒素 | 第27-28页 |
| 2.2.3.1 毒素标准曲线的制备 | 第27页 |
| 2.2.3.2 LC-MS/MS检测玉米样品 | 第27-28页 |
| 2.2.4 ELISA检测毒素 | 第28-30页 |
| 2.2.4.1 抗伏马菌素单链抗体的大量表达 | 第28页 |
| 2.2.4.2 SDS-PAGE电泳 | 第28-29页 |
| 2.2.4.3 棋盘法确定ELISA条件 | 第29页 |
| 2.2.4.4 ELISA标准曲线的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.4.5 ELISA检测样品毒素含量 | 第30页 |
| 2.2.5 DNA片段凝胶回收 | 第30页 |
| 2.2.6 试剂盒法提取质粒DNA | 第30页 |
| 2.2.7 大肠杆菌（DH5α）感受态制备及转化 | 第30-31页 |
| 2.2.8 农杆菌感受态细胞制备及转化 | 第31页 |
| 2.2.9 拟南芥转化 | 第31-32页 |
| 2.2.10 拟南芥叶片基因组DNA提取 | 第32页 |
| 2.2.11 转基因拟南芥PCR鉴定 | 第32页 |
| 2.2.12 转基因拟南芥RT-PCR鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.12.1 总RNA提取 | 第32页 |
| 2.2.12.2 RNA中基因组DNA的去除 | 第32-33页 |
| 2.2.12.3 RNA逆转录为cDNA第一链 | 第33页 |
| 2.2.12.4 RT-PCR | 第33页 |
| 2.2.13 拟南芥抗黄曲霉菌的研究 | 第33-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-52页 |
| 3.1 伏马菌素的检测 | 第34-40页 |
| 3.1.1 菌株鉴定 | 第34-36页 |
| 3.1.1.1 菌株形态观察 | 第34页 |
| 3.1.1.2 菌株分子鉴定 | 第34-36页 |
| 3.1.2 LC-MS/MS测定毒素 | 第36-38页 |
| 3.1.3 伏马菌素免疫检测 | 第38-40页 |
| 3.1.3.1 抗伏马菌素单链抗体的大量表达 | 第38-39页 |
| 3.1.3.2 竞争ELISA标准曲线的制备 | 第39页 |
| 3.1.3.3 竞争ELISA检测样品 | 第39-40页 |
| 3.2 抗黄曲霉菌二聚体蛋白载体的构建与表达 | 第40-45页 |
| 3.2.1 抗黄曲霉菌二聚体蛋白表达载体的构建 | 第40-43页 |
| 3.2.2 抗黄曲霉菌二聚体蛋白的表达与检测 | 第43-45页 |
| 3.3 转基因拟南芥抗黄曲霉菌的研究 | 第45-52页 |
| 3.3.1 拟南芥转化载体构建 | 第45-46页 |
| 3.3.2 农杆菌PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.3 转基因拟南芥PCR鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3.4 转基因拟南芥T1 代阳性苗统计 | 第48页 |
| 3.3.5 转基因拟南芥RT-PCR鉴定 | 第48-50页 |
| 3.3.6 转基因拟南芥抗黄曲霉菌的研究 | 第50-52页 |
| 4. 讨论 | 第52-57页 |
| 4.1 伏马菌素的检测及应用 | 第52-54页 |
| 4.2 二聚体蛋白载体构建及拟南芥抗黄曲霉菌研究 | 第54-57页 |
| 4.2.1 二聚体蛋白载体构建与原核表达 | 第54-55页 |
| 4.2.2 抗体介导拟南芥抗黄曲霉菌的研究 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
