| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第14-26页 |
| 1.1 鸭疫的研究 | 第14-21页 |
| 1.1.1 病原介绍 | 第14-16页 |
| 1.1.2 血清型及检测方法 | 第16-17页 |
| 1.1.3 鸭疫PCR检测方法 | 第17-18页 |
| 1.1.4 毒力因子研究进展 | 第18-21页 |
| 1.1.4.1 外膜蛋白A | 第18页 |
| 1.1.4.2 TonB依赖受体 | 第18-19页 |
| 1.1.4.3 铁载体相互作用蛋白 | 第19-20页 |
| 1.1.4.4 辅溶血素和溶血素 | 第20页 |
| 1.1.4.5 其他可能与鸭疫里默是杆菌相关毒力蛋白 | 第20-21页 |
| 1.2 细菌的耐药性研究 | 第21-23页 |
| 1.2.1 抗生素的主要作用机理 | 第22页 |
| 1.2.2 细菌耐药性的产生机制 | 第22页 |
| 1.2.3 细菌耐药性的遗传机制 | 第22-23页 |
| 1.2.4 细菌耐药性的检测方法 | 第23页 |
| 1.3 基因盒-整合子系统 | 第23-24页 |
| 1.4 细菌卡那霉素的耐药机制 | 第24页 |
| 1.5 50S核糖体蛋白质L27 | 第24-26页 |
| 2 材料和方法 | 第26-43页 |
| 2.1 试验材料 | 第26-29页 |
| 2.1.1 供试菌株及病料样品 | 第26页 |
| 2.1.2 载体和酶 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要培养基和溶液 | 第27页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第27-28页 |
| 2.1.5 抗生素 | 第28页 |
| 2.1.6 引物的设计 | 第28-29页 |
| 2.2 试验方法 | 第29-43页 |
| 2.2.1 鸭疫里默氏杆菌16S rRNA和dnaB基因的双重PCR方法建立 | 第29-30页 |
| 2.2.1.1 基于16S rRNA和danB单重PCR检测鸭疫里默氏杆菌 | 第29页 |
| 2.2.1.2 双重PCR反应体系及条件的优化 | 第29页 |
| 2.2.1.3 双重PCR特异性试验 | 第29页 |
| 2.2.1.4 双重PCR敏感性试验 | 第29-30页 |
| 2.2.1.5 双重PCR重复性试验 | 第30页 |
| 2.2.1.6 临床样品的检测 | 第30页 |
| 2.2.2 贵州大学鸭疫里默氏杆菌双重PCR、血清型鉴定和药敏试验 | 第30页 |
| 2.2.2.1 血清型鉴定 | 第30页 |
| 2.2.2.2 血清型鉴定 | 第30页 |
| 2.2.2.3 kana药敏片鉴定 | 第30页 |
| 2.2.3 Yb2株转座子突变库的构建及卡那霉素耐药基因的筛选鉴定 | 第30-37页 |
| 2.2.3.1 细菌培养及PEP4351转入BW19851 | 第30-31页 |
| 2.2.3.2 鸭疫里默氏杆菌Yb2株和大肠杆菌E.coli BW-19851药敏试验 | 第31页 |
| 2.2.3.3 多粘霉素和红霉素对Yb2株和E.coli BW-19851的MIC测定 | 第31-32页 |
| 2.2.3.4 接合转导 | 第32-33页 |
| 2.2.3.5 鉴定缺失Kana抗性突变株 | 第33页 |
| 2.2.3.6 基因组模板的制备 | 第33-34页 |
| 2.2.3.7 转座子插入位点鉴定 | 第34-37页 |
| 2.2.4 构建突变株DK-2的回复株 | 第37-43页 |
| 2.2.4.1 感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| 2.2.4.2 高保真扩增DK-2的11-50S基因 | 第38页 |
| 2.2.4.3 重组质粒提取 | 第38-39页 |
| 2.2.4.4 酶切 | 第39页 |
| 2.2.4.5 目的片段的回收 | 第39-40页 |
| 2.2.4.6 构建回复质粒 | 第40-41页 |
| 2.2.4.7 突变株DK-2回复株的筛选 | 第41页 |
| 2.2.4.8 检测DK-2、cDK-2和Yb2的最小抑菌浓度（MIC）的测定 | 第41-42页 |
| 2.2.4.9 检测DK-2、cDK-2和Yb2的生长曲线的测定 | 第42页 |
| 2.2.4.10 检测DK-2、cDK-2和Yb2的生长曲线的药敏试验的测定 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-58页 |
| 3.1 鸭疫里默氏杆菌16S rRNA和dnaB基因的双重PCR结果 | 第43-45页 |
| 3.1.1 基于16S rRNA或danB单重PCR检测鸭疫里默氏杆菌结果 | 第43页 |
| 3.1.2 双重PCR反应条件优化结果 | 第43页 |
| 3.1.3 双重PCR方法特异性结果 | 第43-44页 |
| 3.1.4 双重PCR方法敏感性试验 | 第44-45页 |
| 3.1.5 双重PCR方法重复性试验 | 第45页 |
| 3.1.6 临床样品的检测结果 | 第45页 |
| 3.2 贵州大学鸭疫里默氏杆菌双重PCR、血清型鉴定和药敏试验结果 | 第45-46页 |
| 3.3 Yb2转座子随机插入卡那霉素耐药基因的筛选鉴定 | 第46-51页 |
| 3.3.1 鸭疫里默氏杆菌Yb2株和大肠杆菌E.coli BW-19851药敏试验结果 | 第46-48页 |
| 3.3.2 Yb2株和E.coli BW-19851对红霉素和多粘菌素B的MIC测定 | 第48页 |
| 3.3.3 转座子插入的阳性突变株PCR鉴定 | 第48-49页 |
| 3.3.4 Genome Walking结果 | 第49页 |
| 3.3.5 插入位点序列分析结果 | 第49-51页 |
| 3.4 突变株DK-2的回复株构建结果 | 第51-58页 |
| 3.4.1 DK21150S基因的克隆 | 第51页 |
| 3.4.2 回复质粒的鉴定 | 第51-52页 |
| 3.4.3 缺失突变株回复株鉴定 | 第52-54页 |
| 3.4.4 DK-2、cDK-2和Yb2的对卡那霉素最小抑菌浓度（MIC）的测定 | 第54-56页 |
| 3.4.6 检测突变株、回复株和野生株的药敏试验结果 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-61页 |
| 4.1 鸭疫里默氏杆菌16S rRNA和dnaB基因的双重PCR方法 | 第58页 |
| 4.2 贵州大学鸭疫里默氏杆菌血清型鉴定和药敏试验 | 第58-59页 |
| 4.3 Yb2转座子随机插入卡那霉素耐药基因的筛选 | 第59-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第71页 |
