| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 英文缩略表 | 第15-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-23页 |
| 1.1 牛副流感病毒的概况 | 第16-18页 |
| 1.1.1 牛副流感病毒3型形态特征及理化性质 | 第16页 |
| 1.1.2 临床症状，病理变化及其致病性 | 第16-17页 |
| 1.1.3 BPIV3的流行病学 | 第17-18页 |
| 1.2 BPIV3的复制及其基因组特征 | 第18-20页 |
| 1.2.1 BPIV3的基因组结构 | 第18-19页 |
| 1.2.2 BPIV3的复制 | 第19-20页 |
| 1.3 BPIV3的诊断 | 第20-21页 |
| 1.3.1 BPIV3病原学诊断 | 第20页 |
| 1.3.2 免疫学诊断方法 | 第20-21页 |
| 1.4 BPIV3的防控 | 第21-22页 |
| 1.4.1 搞好饲养管理措施 | 第21页 |
| 1.4.2 疫苗免疫预防 | 第21-22页 |
| 1.5 目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 牛副流感病毒3型NP蛋白的单克隆抗体的制备 | 第23-31页 |
| 摘要 | 第23页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-27页 |
| 2.1.1 细胞、质粒、毒株和实验动物 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 NP基因引物的设计 | 第23-24页 |
| 2.1.4 牛副流感病毒3型RNA提取及NP基因的扩增 | 第24页 |
| 2.1.5 BPIV3 NP基因的原核表达载体的构建 | 第24页 |
| 2.1.6 NP基因的原核表达，蛋白纯化与鉴定 | 第24页 |
| 2.1.7 动物免疫 | 第24-25页 |
| 2.1.8 间接ELISA的建立 | 第25页 |
| 2.1.9 细胞融合 | 第25页 |
| 2.1.10 杂交瘤细胞的筛选 | 第25页 |
| 2.1.11 杂交瘤细胞的亚克隆 | 第25页 |
| 2.1.12 腹水的制备，效价测定及纯化 | 第25-26页 |
| 2.1.13 单克隆抗体亚型的鉴定 | 第26页 |
| 2.1.14 单克隆抗体的特异性鉴定 | 第26页 |
| 2.1.15 单克隆抗体的间接免疫荧光鉴定 | 第26页 |
| 2.1.16 单克隆抗体的免疫印迹鉴定 | 第26页 |
| 2.1.17 中和活性的测定 | 第26-27页 |
| 2.2 结果 | 第27-30页 |
| 2.2.1 NP基因的扩增及酶切鉴定 | 第27页 |
| 2.2.2 NP蛋白的表达，纯化及鉴定 | 第27-28页 |
| 2.2.3 单克隆抗体亚型鉴定、腹水效价测定及纯化 | 第28页 |
| 2.2.4 单克隆抗体特异性鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.5 间接免疫荧光鉴定 | 第29页 |
| 2.2.6 Western blot鉴定 | 第29页 |
| 2.2.7 中和活性的测定 | 第29-30页 |
| 2.3 讨论 | 第30-31页 |
| 第三章 NP蛋白的抗原表位鉴定 | 第31-37页 |
| 摘要 | 第31页 |
| 3.1 材料与方法 | 第31-32页 |
| 3.1.1 材料 | 第31页 |
| 3.1.2 NP蛋白的截短表达与抗原表位的初步鉴定 | 第31页 |
| 3.1.3 NP蛋白表位精确定位 | 第31页 |
| 3.1.4 表位的保守性序列比对分析 | 第31-32页 |
| 3.1.5 单克隆抗体的跨种反应分析 | 第32页 |
| 3.1.6 抗原表位的血清学分析 | 第32页 |
| 3.2 结果 | 第32-35页 |
| 3.2.1 NP蛋白的截短表达与抗原表位的初步鉴定 | 第32-33页 |
| 3.2.2 NP蛋白抗原表位的精确定位 | 第33-34页 |
| 3.2.3 抗原表位的保守性与序列分析 | 第34-35页 |
| 3.2.4 单克隆抗体的跨种反应分析 | 第35页 |
| 3.2.5 表位的血清学分析 | 第35页 |
| 3.3 讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 双抗夹心ELISA的建立 | 第37-45页 |
| 摘要 | 第37页 |
| 4.1 材料与方法 | 第37-39页 |
| 4.1.1 病毒、细胞和试剂 | 第37页 |
| 4.1.2 单克隆抗体的标记 | 第37页 |
| 4.1.3 双抗夹心ELISA的建立 | 第37-38页 |
| 4.1.4 临界值的确定 | 第38-39页 |
| 4.1.5 特异性实验鉴定 | 第39页 |
| 4.1.6 重复性试验鉴定 | 第39页 |
| 4.1.7 敏感性实验鉴定 | 第39页 |
| 4.1.8 双抗夹心ELISA与RT-PCR符合率比较 | 第39页 |
| 4.2 结果 | 第39-44页 |
| 4.2.1 封闭试剂和封闭时间的确定 | 第39-40页 |
| 4.2.2 最佳样品孵育时间 | 第40页 |
| 4.2.3 最佳包被抗体 6F8浓度的确定 | 第40页 |
| 4.2.4 最佳检测抗体 7G9-HRP浓度和反应时间的确定 | 第40-41页 |
| 4.2.5 最佳显色时间的确定 | 第41页 |
| 4.2.6 临界值的确定 | 第41页 |
| 4.2.7 特异性实验鉴定 | 第41-42页 |
| 4.2.8 重复性试验鉴定 | 第42页 |
| 4.2.9 敏感性实验鉴定 | 第42-43页 |
| 4.2.10 双抗夹心ELISA与RT-PCR符合率比较 | 第43-44页 |
| 4.3 讨论 | 第44-45页 |
| 第五章 全文结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简历 | 第53页 |
