| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第9-12页 |
| 一、试验研究 | 第12-44页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 1. 材料与方法 | 第14-15页 |
| 1.1 实验动物 | 第14页 |
| 1.2 试剂 | 第14-15页 |
| 1.3 耗材和仪器设备 | 第15页 |
| 2. 研究方法 | 第15-21页 |
| 2.1 小鼠胚胎成纤维细胞的制备 | 第15-16页 |
| 2.2 丝裂霉素C处理小鼠胚胎成纤维细胞 | 第16页 |
| 2.3 转基因小鼠胚胎干细胞的分离与培养 | 第16页 |
| 2.4 Fad3-ES的传代培养、冻存和解冻 | 第16页 |
| 2.5 Fad3-ES的鉴定 | 第16-18页 |
| 2.5.1 碱性磷酸酶染色 | 第16-17页 |
| 2.5.2 OCT-4、SOX-2、NANOG、SSEA-1免疫细胞化学染色 | 第17页 |
| 2.5.3 类胚体形成的试验 | 第17页 |
| 2.5.4 畸胎瘤的制备及分析 | 第17页 |
| 2.5.5 Fad3-ES鉴定 | 第17-18页 |
| 2.6 RT-PCR检测外源基因遗传表达情况 | 第18-19页 |
| 2.7 RT-PCR检测脂肪酸代谢通路上的相关内源基因相对表达情况 | 第19页 |
| 2.8 脂肪酸分析 | 第19-20页 |
| 2.9 细胞培养液成分的脂肪酸分析 | 第20页 |
| 2.10 细胞生长曲线的绘制和倍增时间计算 | 第20页 |
| 2.11 流式细胞仪检测细胞周期 | 第20页 |
| 2.12 流式细胞术检测染色体多倍性 | 第20-21页 |
| 2.13 流式细胞术检测细胞凋亡 | 第21页 |
| 2.14 统计分析 | 第21页 |
| 3 结果 | 第21-35页 |
| 3.1 Fad3-ES的分离与培养 | 第21-22页 |
| 3.2 Fad3-ES外源基因整合情况分析 | 第22-23页 |
| 3.3 碱性磷酸酶及多能性因子的表达检测 | 第23-25页 |
| 3.4 Fad3-ES细胞体内、体外分化能力的分析 | 第25-27页 |
| 3.5 Fad3-ES生长曲线、细胞倍增时间及各培养时间干细胞的形态 | 第27-28页 |
| 3.6 细胞周期检测 | 第28-31页 |
| 3.7 流式细胞术检测染色体多倍性 | 第31页 |
| 3.8 细胞凋亡检测 | 第31-33页 |
| 3.9 脂肪酸代谢相关基因表达检测 | 第33-34页 |
| 3.10 脂肪酸分析 | 第34-35页 |
| 4. 讨论 | 第35-40页 |
| 参考文献 | 第40-43页 |
| 附录 | 第43-44页 |
| 二、文献综述 | 第44-66页 |
| 参考文献 | 第55-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读硕士期间待发表的文章 | 第67页 |
