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二斑叶螨类酵母共生菌和蛛生真菌的分子鉴定及遗传多样性

摘要第10-13页
Abstract第13-16页
第一章 引言第17-19页
第二章 文献综述第19-33页
    1 二斑叶螨的农业防治第19-20页
    2 二斑叶螨的化学防治第20-21页
        2.1 化学杀螨剂第20-21页
        2.2 植物源杀螨剂第21页
    3 二斑叶螨的生物防治第21-24页
        3.1 捕食螨应用第22页
        3.2 微生物防治第22-24页
    4 昆虫(螨)内共生菌及其对宿主的作用第24-26页
        4.1 内共生菌主要类群第24页
        4.2 内共生菌的主要功能第24-26页
            4.2.1 调节宿主与植物之间的相互关系第25页
            4.2.2 影响宿主对病原菌及寄生虫的免疫和抗性第25-26页
            4.2.3 影响宿主的体色第26页
            4.2.4 提高宿主对农药的抗药性第26页
    5 蛛生真菌及其利用潜力第26-30页
        5.1 蛛生真菌的主要类群第26-27页
        5.2 有性麦角菌科(广义)蛛生真菌第27-28页
            5.2.1 广义虫草属第27页
            5.2.2 线虫草菌属第27-28页
            5.2.3 虫壳属第28页
        5.3 丝孢菌纲蛛生真菌第28-30页
            5.3.1 刺束梗孢属第28-29页
            5.3.2 Clathroconium第29页
            5.3.3 球束梗孢属第29页
            5.3.4 糙梗孢属第29页
            5.3.5 被毛孢属第29页
            5.3.6 层束梗孢属第29-30页
            5.3.7 棒束孢属第30页
            5.3.8 蜡蚧菌属第30页
            5.3.9 野村菌属第30页
    6 蛛生真菌生防潜力研究进展第30-33页
        6.1 被毛孢属的生防研究第31页
        6.2 蜡蚧菌属的生防研究第31-32页
        6.3 棒束孢属的生防研究第32-33页
第三章 二斑叶螨类酵母共生菌的分子鉴定第33-48页
    1 材料与方法第33-37页
        1.1 实验材料第33-34页
        1.2 实验用具、试剂及设备第34页
            1.2.1 实验用具第34页
            1.2.2 实验试剂第34页
            1.2.3 主要设备第34页
        1.3 实验方法第34-37页
            1.3.1 二斑叶螨样品的制备第34页
            1.3.2 总DNA的提取第34-35页
            1.3.3 基因组DNA的检测第35页
            1.3.4 PCR扩增及产物测序第35-36页
            1.3.5 测序及数据处理第36页
            1.3.6 系统发育网络的构建第36-37页
            1.3.7 类酵母共生菌形态特征观察第37页
    2 结果与分析第37-46页
        2.1 测序结果与分析第37页
        2.2 类酵母共生菌的初步判断第37-40页
        2.3 类酵母共生菌的分子鉴定第40页
        2.4 类酵母共生菌系统发育地位的界定第40-41页
        2.5 系统发育网络分析第41页
        2.6 类酵母共生菌形态的初步观察第41-46页
    3 讨论第46-48页
第四章 不同螨类类酵母共生菌的遗传差异第48-61页
    1 材料与方法第48-52页
        1.1 实验材料第48-49页
        1.2 实验用具、试剂及设备第49页
            1.2.1 实验用具第49页
            1.2.2 实验试剂第49页
            1.2.3 主要设备第49页
        1.3 实验方法第49-52页
            1.3.1 样品制备第49页
            1.3.2 总DNA提取第49-50页
            1.3.3 基因组DNA检测第50-51页
            1.3.4 PCR扩增及产物测序第51页
            1.3.5 测序及数据处理第51页
            1.3.6 类酵母共生菌序列特征分析第51-52页
    2 结果第52-59页
        2.1 不同取食类型螨的类酵母共生菌的鉴定第52-56页
        2.2 类酵母共生菌序列特征分析第56-59页
            2.2.1 序列特征第56-58页
            2.2.2 遗传距离第58-59页
    3 讨论第59-61页
第五章 取食不同宿主植物的二斑叶螨类酵母共生菌间的遗传差异第61-76页
    1 材料与方法第61-64页
        1.1 实验材料第61-62页
        1.2 实验用具、试剂及设备第62页
            1.2.1 实验用具第62页
            1.2.2 实验试剂第62页
            1.2.3 主要设备第62页
        1.3 实验方法第62-64页
            1.3.1 二斑叶螨样品制备第62页
            1.3.2 总DNA提取第62-63页
            1.3.3 基因组DNA的检测第63页
            1.3.4 PCR扩增及产物测序第63-64页
            1.3.5 测序及数据处理第64页
            1.3.6 类酵母共生菌序列特征分析第64页
            1.3.7 类酵母共生菌单倍型分析第64页
    2 结果第64-72页
        2.1 序列特征第65-67页
        2.2 遗传距离第67-68页
        2.3 系统发育树第68页
        2.4 单倍型分布第68-72页
    3 讨论第72-76页
第六章 蛛生真菌的分离、鉴定及记述第76-107页
    1 材料与方法第76-83页
        1.1 材料第76-78页
            1.1.1 供试菌株及培养第77页
            1.1.2 试验用培养基第77页
            1.1.3 用具、试剂及设备第77-78页
        1.2 方法第78-83页
            1.2.2 标本制作第78页
            1.2.3 显微观察第78-79页
            1.2.4 菌株鉴定第79页
            1.2.5 分子鉴定法第79-83页
    2 结果与分析第83-104页
        2.1 蛛生真菌分类鉴定结果第83页
        2.2 蛛生真菌特征描述第83-99页
            2.2.1 蛛生白僵菌第83-87页
            2.2.2 蛛生枝穗霉第87-91页
            2.2.3 粉质棒束孢第91-92页
            2.2.4 淡黄棒束孢第92-95页
            2.2.5 蛛生蜡蚧菌第95-99页
        2.3 相关虫生真菌属菌株鉴定第99-104页
            2.3.1 松毛虫绿僵菌第99-103页
            2.3.2 蛴螬白僵菌第103-104页
    3 讨论第104-107页
第七章 二斑叶螨致病性蛛生真菌的筛选第107-116页
    1 材料与方法第107-111页
        1.1 实验材料第107-108页
            1.1.1 供试菌株第108页
            1.1.2 供试二斑叶螨第108页
            1.1.3 试验用培养基第108页
        1.2 实验器具和试剂第108-109页
            1.2.1 实验用具第108页
            1.2.2 实验试剂第108页
            1.2.3 主要设备第108-109页
        1.3 实验方法第109-111页
            1.3.1 孢子悬浮液制备第109页
            1.3.2 分生孢子活力检测第109页
            1.3.3 生物测定第109页
            1.3.4 二斑叶螨粉末的制备第109-110页
            1.3.5 初酶液的制备第110页
            1.3.6 碱性蛋白酶酶活的测定第110-111页
            1.3.7 数据处理第111页
    2 结果与分析第111-112页
        2.1 11株蛛(虫)生真菌对二斑叶螨的致病性第111-112页
        2.2 11株菌的碱性蛋白酶酶活第112页
    3 讨论第112-116页
第八章 蛛生真菌侵染相关碱性蛋白酶、几丁质酶和脂肪酶活性的研究第116-127页
    1 材料与方法第116-121页
        1.1 实验材料及试剂第116-117页
            1.1.1 供试菌株第116页
            1.1.2 供试二斑叶螨第116页
            1.1.3 菌株培养基第116-117页
        1.2 测试方法第117-121页
            1.2.1 配制孢子悬浮液第117页
            1.2.2 分生孢子活力检测第117页
            1.2.3 二斑叶螨粉末的制备第117页
            1.2.4 初酶液的制备第117-118页
            1.2.5 几丁质酶酶活的测定第118-119页
            1.2.6 碱性蛋白酶酶活测定第119-120页
            1.2.7 脂肪酶酶活的测定第120-121页
    2 结果第121-125页
        2.1 三种酶的酶活变化趋势第121-122页
        2.2 蛛生白僵菌碱性蛋白酶活性比较第122-123页
        2.3 蛛生白僵菌脂肪酶活性比较第123-124页
        2.4 蛛生白僵菌几丁质酶酶活比较第124-125页
    3 讨论第125-127页
第九章 蛛生真菌对二斑叶螨体内解毒酶与保护酶的影响第127-143页
    1 材料与方法第127-128页
        1.1 材料第127-128页
            1.1.1 供试菌株第127页
            1.1.2 供试二斑叶螨第127页
            1.1.3 菌株培养基第127-128页
        1.2 实验方法第128页
            1.2.1 孢子悬浮液制备第128页
            1.2.2 供试二斑叶螨第128页
    2 主要试剂和仪器第128-129页
        2.1 主要试剂第128页
        2.2 主要仪器第128-129页
    3 二斑叶螨初侵染体内解毒酶活性测定第129-132页
        3.1 羧酸酯酶(CarE)酶活的测定第129-130页
            3.1.1 测定原理第129页
            3.1.2 操作流程第129页
            3.1.3 GST活性计算第129-130页
        3.2 谷胱甘肽-S-转移酶酶活测定第130-131页
            3.2.1 测定原理第130页
            3.2.2 操作流程第130页
            3.2.3 GST活性计算第130-131页
        3.3 多酚氧化酶酶活测定第131-132页
            3.3.1 测定原理第131页
            3.3.2 粗酶液提取第131页
            3.3.3 测定流程第131页
            3.3.4 PPO活性计算第131-132页
    4 二斑叶螨的保护酶活性测定第132-135页
        4.1 过氧化氢酶酶活的测定第132页
            4.1.1 测定原理:第132页
            4.1.2 操作步骤:第132页
            4.1.3 CAT活性计算第132页
        4.2 超氧化物歧化酶酶活的测定第132-134页
            4.2.1 测定原理第132-133页
            4.2.2 操作步骤第133页
            4.2.3 SOD酶活计算第133-134页
        4.3 过氧化物酶酶活测定第134-135页
            4.3.1 测定原理第134页
            4.3.2 操作流程第134页
            4.3.3 POD活性计算第134-135页
    5 结果与分析第135-141页
        5.1 羧酸酯酶酶活变化第135-136页
        5.2 谷胱甘肽S转移酶活力变化第136页
        5.3 多酚氧化酶酶活变化第136-138页
        5.4 过氧化氢酶酶活变化第138页
        5.5 超氧化物歧化酶酶活变化第138页
        5.6 过氧化物酶酶活变化第138-141页
    6 讨论第141-143页
第十章 结论与展望第143-149页
    1 主要研究结果与结论第143-146页
        1.1 二斑叶螨拥有类酵母共生菌第143页
        1.2 不同螨类的类酵母共生菌具有遗传差异第143-144页
        1.3 取食不同植物之二斑叶螨的类酵母共生菌存在遗传差异第144页
        1.4 发现蛛生真菌新物种资源并予描述第144-145页
        1.5 蛛生真菌对二斑叶螨具有致病性且有高毒力菌株第145页
        1.6 二斑叶螨促进蛛生真菌碱性蛋白酶、几丁质酶和脂肪酶活性第145-146页
        1.7 蛛生真菌影响二斑叶螨体内解毒酶和保护酶活性第146页
    2 主要创新点第146-147页
        2.1 首次确认二斑叶螨具有类酵母共生菌第146页
        2.2 首次证明不同螨类皆有类酵母共生菌,同种螨不同种群的类酵母共生菌有差异第146-147页
        2.3 发现5种蛛生真菌新资源第147页
        2.4 证明蛛生真菌对二斑叶螨具有致病性第147页
    3 后续研究设想第147-149页
        3.1 叶螨类酵母共生菌功能及互作机制研究第147页
        3.2 蛛生真菌对叶螨致病性及致病机理研究第147-148页
        3.3 叶螨对蛛生真菌侵染的防御机制研究第148-149页
参考文献第149-175页
致谢第175-176页
附录第176-177页

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