| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-26页 |
| 1.1 概述 | 第16-17页 |
| 1.2 模式昆虫果蝇的性别调控模式 | 第17-20页 |
| 1.2.1 体细胞性别调控 | 第17-18页 |
| 1.2.2 生殖细胞的性别调控 | 第18-19页 |
| 1.2.3 剂量补偿 | 第19-20页 |
| 1.3 Sxl在果蝇的及其他昆虫的性别调控通路中的研究现状 | 第20-23页 |
| 1.3.1 果蝇中Sxl的研究 | 第20-22页 |
| 1.3.2 其他物种中Sxl的研究现状 | 第22-23页 |
| 1.4 家蚕的性别调控的研究进展 | 第23-26页 |
| 1.4.1 家蚕性染色体组成 | 第23-24页 |
| 1.4.2 家蚕性别决定模式 | 第24-26页 |
| 第二章 引言 | 第26-28页 |
| 2.1 研究背景及意义 | 第26页 |
| 2.2 科学问题及研究内容 | 第26-27页 |
| 2.3 技术路线 | 第27-28页 |
| 第三章 家蚕Bmsxl功能域克隆、原核表达纯化及抗体制备 | 第28-42页 |
| 3.1 材料与方法 | 第28-33页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第28页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第28-29页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第29页 |
| 3.1.4 主要溶剂及配制 | 第29-33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-38页 |
| 3.2.1 家蚕Bmsxl基因的功能域的表达 | 第33-34页 |
| 3.2.2 原核表达 | 第34-35页 |
| 3.2.3 目的蛋白纯化 | 第35-37页 |
| 3.2.4 Bmsxl多克隆抗体检测 | 第37-38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-41页 |
| 3.3.1 重组质粒pET-28a(+)-Bmsxl-domain菌液PCR检测 | 第38页 |
| 3.3.2 pET-28a(+)-Bmsxl-domain的酶切检测 | 第38-39页 |
| 3.3.3 原核表达目的蛋白 | 第39页 |
| 3.3.4 目的蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| 3.3.5 纯化蛋白银染检测 | 第40页 |
| 3.3.6 Bmsxl多克隆抗体的检测 | 第40-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-42页 |
| 第四章 Bmsxl基因对自身的结合及调控 | 第42-58页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第42-44页 |
| 4.1.1 材料 | 第42页 |
| 4.1.2 主要试剂及仪器 | 第42页 |
| 4.1.3 主要溶液配制 | 第42-44页 |
| 4.2 方法与步骤 | 第44-53页 |
| 4.2.1 提取RNA及反转cDNA | 第44-45页 |
| 4.2.2 Bmsxl RT-PCR水平检测 | 第45页 |
| 4.2.3 真核载体构建 | 第45-48页 |
| 4.2.4 精巢核蛋白及总蛋白的抽提 | 第48页 |
| 4.2.5 凝胶阻滞实验 | 第48-50页 |
| 4.2.6 RNAIP | 第50-51页 |
| 4.2.7 提RNA并反转为cDNA | 第51页 |
| 4.2.8 PCR检测 | 第51-52页 |
| 4.2.9 细胞培养与转染步骤 | 第52页 |
| 4.2.10 细胞裂解、RNA提取及反转 | 第52页 |
| 4.2.11 PCR检测 | 第52-53页 |
| 4.3 结果与分析 | 第53-56页 |
| 4.3.1 Bmsxl各组织的RT-PCR检测 | 第53页 |
| 4.3.2 EMSA实验结果 | 第53-54页 |
| 4.3.3 RNAIP实验结果 | 第54-55页 |
| 4.3.4 突变多聚U序列,检测Bmsxl拼接形式的变化 | 第55-56页 |
| 4.4 讨论 | 第56-58页 |
| 第五章 Bmsxl对Bmdsx拼接的调控 | 第58-70页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第58-59页 |
| 5.1.1 材料 | 第58页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第58页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第58-59页 |
| 5.1.4 主要溶剂配制 | 第59页 |
| 5.2 方法 | 第59-64页 |
| 5.2.1 Minidsx-wild、Minidsx-mutU真核质粒的构建 | 第59-60页 |
| 5.2.2 Minidsx-wild、Minidsx-mutU真核质粒转染、提RNA及反转 | 第60页 |
| 5.2.3 PCR检测 | 第60-61页 |
| 5.2.4 Bmsxl的双链RNA干涉 | 第61-63页 |
| 5.2.5 干涉效果的荧光定量检测和表型观察 | 第63-64页 |
| 5.3 结果分析 | 第64-68页 |
| 5.3.1 转染正常及突变质粒后对Bmdsx拼接形式的检测 | 第64-65页 |
| 5.3.2 荧光定量检测干涉Bmsxl后Bmdsx拼接形式的变化 | 第65-66页 |
| 5.3.3 双链干涉Bmsxl后,家蚕表型的变化 | 第66-68页 |
| 5.4 讨论 | 第68-70页 |
| 第六章 Bmsxl对Bm-nanos翻译的调控 | 第70-78页 |
| 6.1 材料与试剂 | 第70页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第70页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第70页 |
| 6.1.3 主要仪器 | 第70页 |
| 6.1.4 主要溶剂及配制 | 第70页 |
| 6.2 方法和步骤 | 第70-73页 |
| 6.2.1 1180-luc-nanos-wild、1180-luc-nanos-mut、1180-Bmsxl-PA三种真核表达载体的构建 | 第70-71页 |
| 6.2.2 细胞质蛋白及总蛋白的抽提 | 第71页 |
| 6.2.3 凝胶阻滞实验 | 第71-72页 |
| 6.2.4 RNAIP | 第72页 |
| 6.2.5 提取RNA并反转为cDNA | 第72页 |
| 6.2.6 PCR检测 | 第72页 |
| 6.2.7 细胞培养及转染步骤 | 第72页 |
| 6.2.8 荧光素酶活测定 | 第72-73页 |
| 6.3 结果及分析 | 第73-77页 |
| 6.3.1 EMSA实验结果 | 第73-74页 |
| 6.3.2 RNAIP实验结果 | 第74-75页 |
| 6.3.3 1180-A4-Bmsxl-PA、1180-pGL3-luc-3'UTR-wild、1180-pGL3-luc-3'UTR-mutU表达载体构建检测 | 第75页 |
| 6.3.4 Bmsxl对家蚕nanos的调控 | 第75-77页 |
| 6.4 讨论 | 第77-78页 |
| 第七章 综合与讨论 | 第78-80页 |
| 7.1 Bmsxl基因功能域克隆、原核表达纯化及多抗制备 | 第78页 |
| 7.2 Bmsxl基因自身结合对拼接形式的调控 | 第78页 |
| 7.3 家蚕Bmsxl对Bmdsx选择性拼接的调控 | 第78-79页 |
| 7.4 家蚕Bmsxl对家蚕Bm-nanos基因的调控 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-90页 |
| 在读期间发表的论文及参加课题 | 第90-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
