| 缩略表 | 第4-10页 |
| 第一章 携带海葵溶细胞素EquinatoxinⅡ的溶瘤腺病毒的构建及其抗肿瘤活性研究 | 第10-55页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 绪论 | 第13-20页 |
| 1.1 癌症治疗的研究概况 | 第13-15页 |
| 1.2 溶瘤腺病毒的概述 | 第15-17页 |
| 1.3 海葵溶细胞素的研究概述 | 第17-18页 |
| 1.4 海葵溶细胞素的抗肿瘤活性研究 | 第18-19页 |
| 1.5 EquinatoxinⅡ的研究进展 | 第19页 |
| 1.6 研究内容及目的意义 | 第19-20页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第19页 |
| 1.6.2 研究目的意义 | 第19-20页 |
| 2 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1 主要试剂 | 第20页 |
| 2.2 主要菌株及质粒 | 第20页 |
| 2.3 细胞株 | 第20-21页 |
| 2.4 腺病毒 | 第21页 |
| 2.5 实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.6 主要溶液配置 | 第22页 |
| 3 实验步骤 | 第22-40页 |
| 3.1 携带EqtⅡ基因的真核表达载体的构建 | 第22-27页 |
| 3.2 携带EqtⅡ基因的腺病毒载体的构建 | 第27-31页 |
| 3.3 携带EqtⅡ基因的溶瘤腺病毒的构建 | 第31-37页 |
| 3.3.1 HEK293细胞的培养 | 第31-32页 |
| 3.3.2 非复制型病毒Ad- EqtⅡ和复制型病毒SD55- EqtⅡ的包装及鉴定 | 第32-34页 |
| 3.3.3 非复制型病毒 Ad-EqtⅡ和复制型病毒 SD55-EqtⅡ的扩增、纯化及滴度测定 | 第34-37页 |
| 3.3.4 非复制型病毒Ad-EGFP和复制型病毒ZD55的小量扩增以及滴度测定 | 第37页 |
| 3.4 体外实验检测重组病毒的抗肿瘤活性 | 第37-40页 |
| 3.4.1 Western Blot检测重组溶瘤腺病毒Ad- EqtⅡ和SD55- EqtⅡ携带外源EqtⅡ基因的表达水平 | 第37-39页 |
| 3.4.2 MTT检测重组病毒对肿瘤细胞以及正常细胞的杀伤效果 | 第39页 |
| 3.4.3 结晶紫染色观察病毒细胞毒性 | 第39页 |
| 3.4.4 Hoechst33342荧光染色 | 第39-40页 |
| 4 实验结果 | 第40-53页 |
| 4.1 真核表达载体p EGFP- EqtⅡ-C1的鉴定结果 | 第40-41页 |
| 4.1.1 目的基因的获得 | 第40-41页 |
| 4.1.2 重组质粒的鉴定 | 第41页 |
| 4.2 携带EqtⅡ的腺病毒载体的鉴定结果 | 第41-45页 |
| 4.2.1 重组质粒p CA13- EqtⅡ的鉴定结果 | 第41-42页 |
| 4.2.2 重组质粒pshuttle- EqtⅡ和p SD55- EqtⅡ的鉴定结果 | 第42-43页 |
| 4.2.3 重组质粒pshuttle- EqtⅡ和p SD55- EqtⅡ经感受态BJ5183重组后MLu I酶切鉴定结果 | 第43-45页 |
| 4.3 携带EqtⅡ基因的溶瘤腺病毒的包装、扩增以及滴度测定 | 第45-47页 |
| 4.3.1 腺病毒Ad- EqtⅡ和SD55- EqtⅡ的鉴定 | 第45-46页 |
| 4.3.2 腺病毒Ad- EqtⅡ和SD55- EqtⅡ的滴度测定 | 第46-47页 |
| 4.4 体外实验检测病毒对恶性肿瘤细胞的杀伤效果 | 第47-53页 |
| 4.4.1 Western Blot检测EqtⅡ基因在细胞内的表达情况 | 第47-48页 |
| 4.4.2 MTT法检测病毒Ad- EqtⅡ和SD55- EqtⅡ对癌细胞的杀伤效果 | 第48-51页 |
| 4.4.3 结晶紫实验检测细胞病变效应 | 第51-52页 |
| 4.4.4 Hoechst 33342荧光染色结果 | 第52-53页 |
| 5 讨论 | 第53-54页 |
| 6 结论 | 第54-55页 |
| 第二章 天然吡喃酮的结构修饰及其抗肿瘤活性研究 | 第55-83页 |
| 摘要 | 第55-57页 |
| Abstract | 第57-59页 |
| 1 绪论 | 第59-63页 |
| 1.1 天然抗肿瘤药物的概述 | 第59-60页 |
| 1.2 天然吡喃类药物的抗肿瘤活性研究 | 第60-61页 |
| 1.3 Akt与肿瘤的现状研究 | 第61-62页 |
| 1.4 研究内容及目的意义 | 第62-63页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第62页 |
| 1.4.2 研究目的意义 | 第62-63页 |
| 2 实验材料 | 第63-68页 |
| 2.1 细胞株 | 第63页 |
| 2.2 材料 | 第63-67页 |
| 2.3 主要试剂 | 第67页 |
| 2.4 主要仪器 | 第67-68页 |
| 2.5 主要溶液配置 | 第68页 |
| 3 实验方法 | 第68-73页 |
| 3.1 样品溶解性探索 | 第68-69页 |
| 3.2 化合物活性初筛 | 第69页 |
| 3.3 药物对不同肿瘤细胞系的增值抑制作用 | 第69-70页 |
| 3.4 药物对人红白血病K562细胞株的生长作用影响 | 第70页 |
| 3.5 Hoechst33342荧光染色 | 第70-71页 |
| 3.6 Caspase等凋亡蛋白的检测 | 第71页 |
| 3.7 荧光定量PCR的分析 | 第71-73页 |
| 4 实验结果 | 第73-80页 |
| 4.1 化合物的活性初筛 | 第73-74页 |
| 4.2 药物对不同肿瘤细胞株的增值抑制结果 | 第74-77页 |
| 4.3 药物对K562细胞生长作用的影响 | 第77-78页 |
| 4.4 Hoechst染色结果 | 第78-79页 |
| 4.5 Western Blot检测凋亡蛋白 | 第79页 |
| 4.6 荧光定量PCR分析Akt基因表达水平 | 第79-80页 |
| 5 讨论 | 第80-82页 |
| 6 结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
