摘要 | 第7-10页 |
Abstract | 第10-14页 |
第1章 文献综述 | 第15-28页 |
1.1 白菜型油菜黄籽性状的研究 | 第15-18页 |
1.1.1 黄籽油菜的品质特点 | 第15-16页 |
1.1.2 白菜型黄籽油菜的遗传特性 | 第16-17页 |
1.1.3 黄籽性状种皮色泽基因的定位研究 | 第17-18页 |
1.2 拟南芥和白菜型油菜起源、进化的相关性研究 | 第18-19页 |
1.3 拟南芥类黄酮途径透明种皮(Transparent Testa,TT)基因的研究 | 第19-23页 |
1.3.1 拟南芥类黄酮代谢途径 | 第19-21页 |
1.3.2 拟南芥透明种皮基因的研究 | 第21-23页 |
1.4 油菜同源TT基因的表达和克隆研究 | 第23-24页 |
1.5 高通量测序在性状定位上的应用 | 第24-26页 |
1.6 本研究的目的与意义 | 第26-28页 |
第2章 精细定位大黄油菜粒色性状候选基因 | 第28-42页 |
2.1 实验材料 | 第28-29页 |
2.1.1 材料特征 | 第28-29页 |
2.1.2 群体构建 | 第29页 |
2.2 主要的实验仪器及试剂 | 第29页 |
2.3 实验方法 | 第29-34页 |
2.3.1 开发更紧密连锁的SSR标记并构建遗传连锁图谱 | 第29-30页 |
2.3.1.1 材料选取 | 第29-30页 |
2.3.1.2 SSR标记开发及图谱构建绘制 | 第30页 |
2.3.2 基于分离群体分组分析法(BSA)的全基因组重测序 | 第30-34页 |
2.3.2.1 材料选取及样品检测 | 第30-31页 |
2.3.2.2 文库构建、库检及测序 | 第31-32页 |
2.3.2.3 重测序原始数据的生物信息学分析 | 第32-34页 |
2.4 结果与分析 | 第34-41页 |
2.4.1 SSR标记开发和遗传连锁图谱构建 | 第34-35页 |
2.4.2 全基因组重测序定位目标基因所在候选区间 | 第35-39页 |
2.4.2.1 测序样品质量控制及测序流程 | 第35-37页 |
2.4.2.2 子代SNP-index及ΔSNP-index分析 | 第37-39页 |
2.4.3 ΔSNP-index结合遗传连锁图谱精细定位目标基因 | 第39-41页 |
2.5 讨论 | 第41-42页 |
第3章 大黄油菜粒色候选基因BrTT1的克隆及功能研究 | 第42-67页 |
3.1 实验材料和试剂 | 第42-43页 |
3.1.1 实验材料 | 第42页 |
3.1.2 菌株和质粒 | 第42页 |
3.1.3 主要仪器设备及试剂 | 第42-43页 |
3.2 实验方法和步骤 | 第43-52页 |
3.2.1 DNA和RNA提取 | 第43-44页 |
3.2.2 反转录总cDNA第一链的合成 | 第44页 |
3.2.3 基因序列分析及系统进化树构建 | 第44-45页 |
3.2.4 互补转化载体构建 | 第45-49页 |
3.2.4.1 候选基因BrTT1全长克隆 | 第45页 |
3.2.4.2 候选基因全长载体的构建与鉴定 | 第45-47页 |
3.2.4.3 载体pTT1::TT1转化拟南芥tt1突变体CS82 | 第47-48页 |
3.2.4.4 载体pTT1::TT1转化白菜型油菜黄籽亲本大黄 | 第48-49页 |
3.2.5 超量表达载体的构建 | 第49-50页 |
3.2.5.1 全长开放阅读框(ORF)序列的克隆 | 第49页 |
3.2.5.2 超量表达载体的构建与鉴定 | 第49页 |
3.2.5.3 超量表达载体p35S::TT1与p35S::tt1转化拟南芥tt1突变体CS82 | 第49-50页 |
3.2.6 亚细胞定位载体的构建 | 第50-52页 |
3.2.6.1 亚细胞定位载体片段的克隆 | 第50页 |
3.2.6.2 亚细胞定位载体的构建与鉴定 | 第50页 |
3.2.6.3 亚细胞定位载体转化洋葱表皮细胞和本氏烟草(N.benthamian) | 第50-52页 |
3.3 结果与分析 | 第52-64页 |
3.3.1 白菜型油菜粒色性状候选基因BrTT1的克隆及序列分析 | 第52-55页 |
3.3.2 候选基因BrTT1的蛋白序列分析、结构预测及进化分析 | 第55-58页 |
3.3.3 BrTT1基因的遗传转化互补分析 | 第58-61页 |
3.3.4 BrTT1基因的超量表达分析 | 第61-62页 |
3.3.5 BrTT1基因的亚细胞定位分析 | 第62-64页 |
3.4 讨论 | 第64-67页 |
3.4.1 白菜型油菜粒色基因与拟南芥TT基因的关系 | 第64页 |
3.4.2 大黄油菜种皮色泽形成机制的初步推断 | 第64-65页 |
3.4.3 白菜型油菜遗传转化体系的探讨 | 第65-67页 |
第4章 白菜型油菜黄褐籽种皮中类黄酮积累动态规律及类黄酮途径基因差异表达分析 | 第67-78页 |
4.1 主要实验仪器试剂及实验材料 | 第67页 |
4.1.1 主要实验仪器及试剂 | 第67页 |
4.1.2 实验材料 | 第67页 |
4.2 实验方法和步骤 | 第67-69页 |
4.2.1 不同时期组织材料的选取 | 第67-68页 |
4.2.2 不同时期组织材料总RNA的提取及cDNA第一链的获得 | 第68页 |
4.2.3 类黄酮途径基因的差异表达 | 第68-69页 |
4.3 结果与分析 | 第69-76页 |
4.3.1 白菜型油菜黄褐籽不同发育时期种子粒色性状动态变化 | 第69-70页 |
4.3.2 白菜型油菜黄褐籽不同发育时期的种皮中类黄酮代谢相关基因差异表达分析 | 第70-76页 |
4.4 讨论 | 第76-78页 |
4.4.1 白菜型油菜黄褐籽种皮中原花色素的积累可能导致黄褐籽种皮粒色的差异 | 第76页 |
4.4.2 白菜型油菜种皮中类黄酮代谢相关基因的差异表达可能是导致黄褐籽种皮粒色差异的根本原因 | 第76-78页 |
第5章 结论 | 第78-82页 |
5.1 主要研究结果 | 第78-80页 |
5.2 本研究创新之处 | 第80页 |
5.3 下一步研究计划 | 第80-82页 |
参考文献 | 第82-98页 |
致谢 | 第98-99页 |
附录 | 第99-105页 |
作者简介 | 第105页 |
已获奖项 | 第105页 |
参与科研项目及论文发表情况 | 第105页 |