| 致谢 | 第5-9页 |
| 英文缩略表 | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| 文献综述 | 第12-26页 |
| 1 鸭源鸡杆菌概述 | 第12-20页 |
| 1.1 鸭源鸡杆菌的病原学特征 | 第12-13页 |
| 1.1.1 主要形态特征 | 第12页 |
| 1.1.2 主要培养特性 | 第12页 |
| 1.1.3 主要生化特性 | 第12-13页 |
| 1.2 鸭源鸡杆菌的致病性 | 第13-15页 |
| 1.3 鸭源鸡杆菌的传播途径 | 第15页 |
| 1.4 鸭源鸡杆菌的毒力因子 | 第15-20页 |
| 1.4.1 RTX样毒素GtxA | 第15-17页 |
| 1.4.2 菌毛 | 第17-19页 |
| 1.4.3 外膜囊泡 | 第19页 |
| 1.4.4 荚膜 | 第19-20页 |
| 1.4.5 金属蛋白酶 | 第20页 |
| 1.4.6 生物被膜 | 第20页 |
| 1.4.7 血凝素 | 第20页 |
| 2 巴氏杆菌科基因敲除技术的研究进展 | 第20-25页 |
| 2.1 自然转化法 | 第21-22页 |
| 2.2 接合转移法 | 第22-24页 |
| 2.3 Red重组技术 | 第24-25页 |
| 3 小结 | 第25-26页 |
| 试验一 鸭源鸡杆菌flfA基因的鉴定分析及原核表达 | 第26-39页 |
| 1 材料与方法 | 第27-30页 |
| 1.1 材料 | 第27-28页 |
| 1.1.1 菌株和质粒 | 第27页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第27-28页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第28页 |
| 1.2 方法 | 第28-30页 |
| 1.2.1 引物的设计与合成 | 第28页 |
| 1.2.2 菌株的复苏和细菌基因组的粗提 | 第28页 |
| 1.2.3 G. anatis flfA基因的克隆及其序列分析 | 第28-29页 |
| 1.2.4 Flf A蛋白B细胞抗原表位的预测 | 第29页 |
| 1.2.5 原核表达载体pET-28a-flfA的构建 | 第29页 |
| 1.2.6 菌毛蛋白FlfA的表达和纯化 | 第29页 |
| 1.2.7 兔源抗血清的制备及重组蛋白的免疫印迹(Western Blotting)分析 | 第29-30页 |
| 1.2.8 不同鸭源鸡杆菌中FlfA蛋白表达情况的检测 | 第30页 |
| 2 结果 | 第30-37页 |
| 2.1 18株G. anatis flfA基因的克隆及其序列分析结果 | 第30-31页 |
| 2.2 6株G. anatis flfA基因推导的氨基酸序列同源性分析及其优势抗原表位的预测 | 第31-33页 |
| 2.3 原核表达载体pET-28a-flfA的构建 | 第33-34页 |
| 2.4 SDS-PAGE检测重组蛋白FlfA的表达 | 第34-36页 |
| 2.5 重组蛋白及不同鸭源鸡杆菌中FlfA蛋白表达情况的免疫印迹鉴定 | 第36-37页 |
| 3 讨论 | 第37-39页 |
| 试验二 鸭源鸡杆菌对鸡输卵管原代上皮细胞黏附和侵袭能力的测定 | 第39-45页 |
| 1 材料与方法 | 第40-41页 |
| 1.1 材料 | 第40页 |
| 1.1.1 菌株 | 第40页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 1.1.3 实验动物 | 第40页 |
| 1.2 方法 | 第40-41页 |
| 1.2.1 菌株复壮 | 第40页 |
| 1.2.2 鸡输卵管原代上皮细胞的制备和培养 | 第40页 |
| 1.2.3 鸭源鸡杆菌Yu-PDS-Ru1SLG株对鸡输卵管原代上皮细胞侵袭的免疫组织化学检测 | 第40页 |
| 1.2.4 鸭源鸡杆菌Yu-PDS-Ru1SLG株对鸡输卵管原代上皮细胞黏附的免疫组织化学检测 | 第40-41页 |
| 1.2.5 19株鸭源鸡杆菌对鸡输卵管原代上皮细胞黏附能力的测定 | 第41页 |
| 2 结果 | 第41-43页 |
| 2.1 鸭源鸡杆菌Yu-PDS-Ru1SLG株对鸡输卵管原代上皮细胞的侵袭情况 | 第41-42页 |
| 2.2 鸭源鸡杆菌Yu-PDS-Ru1SLG株对鸡输卵管原代上皮细胞的黏附动态 | 第42-43页 |
| 2.3 19株鸭源鸡杆菌对鸡输卵管原代上皮细胞的黏附能力的测定结果 | 第43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 试验三 鸭源鸡杆菌flf A基因缺失突变株的筛选 | 第45-56页 |
| 1 材料与方法 | 第46-51页 |
| 1.1 材料 | 第46-48页 |
| 1.1.1 菌株 | 第46页 |
| 1.1.2 本研究中使用的质粒和部分载体的结构示意图 | 第46-47页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第47页 |
| 1.1.4 溶液配制 | 第47-48页 |
| 1.2 方法 | 第48-51页 |
| 1.2.1 引物的设计与合成 | 第48-49页 |
| 1.2.2 Gmr抗性盒子及同源重组质粒pBC-flfA-Gm~r的构建 | 第49页 |
| 1.2.3 同源重组质粒pREΔflfA的构建 | 第49页 |
| 1.2.4 G. anatis自然感受态细胞的制备和突变株的筛选 | 第49-50页 |
| 1.2.5 通过接合转移法进行突变株的筛选 | 第50-51页 |
| 2 结果 | 第51-54页 |
| 2.1 同源重组质粒pBC-flfA-Gmr的构建 | 第51-53页 |
| 2.2 同源重组质粒pREΔflfA的构建 | 第53-54页 |
| 2.3 自然转化法筛选突变株的结果 | 第54页 |
| 2.4 接合转移法筛选突变株的结果 | 第54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| 全文总结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 附录 | 第64-65页 |
| ABSTRACT | 第65-67页 |
