| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 绪论 | 第17-33页 |
| 1.1 农药防治的现状及微生物源农药的分类 | 第17-21页 |
| 1.1.1 活体微生物农药 | 第18-19页 |
| 1.1.2 农用抗生素 | 第19-21页 |
| 1.1.2.1 细菌病害抗生素 | 第19页 |
| 1.1.2.2 真菌病害抗生素 | 第19-20页 |
| 1.1.2.3 病毒病抗生素 | 第20页 |
| 1.1.2.4 杀虫、杀螨抗生素 | 第20页 |
| 1.1.2.5 除草剂抗生素 | 第20-21页 |
| 1.1.2.6 植物生长调节 | 第21页 |
| 1.2 核苷类抗生素的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.2.1 核苷类抗生素 | 第21页 |
| 1.2.2 核苷类抗生素的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3 丰加霉素的研究进展 | 第22-24页 |
| 1.3.1 丰加霉素的特性 | 第22-23页 |
| 1.3.2 淀粉产色链霉菌1628的特性及研究进展 | 第23-24页 |
| 1.4 链霉菌及次级代谢产物的合成 | 第24-26页 |
| 1.4.1 链霉菌的特性及研究进展 | 第24-25页 |
| 1.4.2 链霉菌次级代谢产物合成机制与改良方法 | 第25-26页 |
| 1.5 核糖体工程 | 第26-32页 |
| 1.5.1 核糖体工程简介 | 第26页 |
| 1.5.2 核糖体工程的原理及应用实例 | 第26-30页 |
| 1.5.3 核糖体工程的应用实例 | 第30-32页 |
| 1.6 本论文研究的意义 | 第32-33页 |
| 1.6.1 研究意义 | 第32页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第32-33页 |
| 2 利用核糖体工程技术筛选高产丰加霉素的淀粉产色链霉菌1628 | 第33-42页 |
| 2.1 引言 | 第33页 |
| 2.2 材料 | 第33-35页 |
| 2.2.1 菌株 | 第33页 |
| 2.2.2 培养基 | 第33-34页 |
| 2.2.2.1 LB培养基 | 第33-34页 |
| 2.2.2.2 MS培养基 | 第34页 |
| 2.2.2.3 种子培养基 | 第34页 |
| 2.2.2.4 发酵培养基 | 第34页 |
| 2.2.3 缓冲液 | 第34页 |
| 2.2.4 试剂、工具酶及试剂盒 | 第34-35页 |
| 2.2.5 主要仪器 | 第35页 |
| 2.3 方法 | 第35-37页 |
| 2.3.1 链霉菌总DNA的提取 | 第35页 |
| 2.3.2 rpoB基因的扩增 | 第35-36页 |
| 2.3.3 割胶回收，连接，测序 | 第36页 |
| 2.3.4 大肠杆菌感受态的制备及DNA的转化 | 第36页 |
| 2.3.5 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第36页 |
| 2.3.6 HPLC检测TM含量 | 第36-37页 |
| 2.3.6.1 样品的制备 | 第36页 |
| 2.3.6.2 流动相的制备 | 第36-37页 |
| 2.3.6.3 洗脱方法及其他参数设计 | 第37页 |
| 2.3.7 突变株遗传稳定性检测 | 第37页 |
| 2.4 结果与分析 | 第37-40页 |
| 2.4.1 1628菌株最小抑菌浓度的确定（MIC） | 第37页 |
| 2.4.2 1628菌株突变株的筛选 | 第37-40页 |
| 2.5 讨论 | 第40-42页 |
| 3 突变株S.diastatochromogenes 1628-T15和1628-T62的特性比较分析 | 第42-57页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 材料 | 第42-44页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第42页 |
| 3.2.2 培养基 | 第42页 |
| 3.2.3 缓冲液 | 第42-43页 |
| 3.2.4 试剂、工具酶及试剂盒 | 第43页 |
| 3.2.5 引物设计 | 第43页 |
| 3.2.6 主要仪器 | 第43-44页 |
| 3.3 方法 | 第44-47页 |
| 3.3.1 突变株1628-T15与1628-T62的adpA、toyG基因的PCR扩增 | 第44页 |
| 3.3.2 割胶回收、连接、测序 | 第44页 |
| 3.3.3 大肠杆菌感受态的制备及DNA的转化 | 第44页 |
| 3.3.4 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第44页 |
| 3.3.5 链霉菌总DNA的提取 | 第44页 |
| 3.3.6 S. diastatochromogenes 1628生长曲线的测定 | 第44页 |
| 3.3.7 HPLC检测TM含量 | 第44页 |
| 3.3.8 链霉菌总RNA的提取 | 第44-45页 |
| 3.3.9 基因表达量的检测 | 第45页 |
| 3.3.10 接合转移 | 第45-46页 |
| 3.3.10.1 供体菌的准备 | 第45页 |
| 3.3.10.2 受体菌的准备 | 第45页 |
| 3.3.10.3 供体菌与受体菌之间的接合转移 | 第45-46页 |
| 3.3.10.4 接合子的验证 | 第46页 |
| 3.3.11 重组菌的表观验证 | 第46页 |
| 3.3.12 GUS酶活的检测 | 第46页 |
| 3.3.13 样品的制备 | 第46页 |
| 3.3.14 抑菌圈实验 | 第46-47页 |
| 3.3.15 实验菌丝的观测 | 第47页 |
| 3.4 结果与方法 | 第47-55页 |
| 3.4.1 突变株1628-T15与1628-T62的菌体生长状态 | 第47-49页 |
| 3.4.2 突变株1628-T15与1628-T62的合成TM过程曲线 | 第49页 |
| 3.4.3 突变株 1628-T15与1628-T62中adpA_(sd)和toyG基因转录水平 | 第49-50页 |
| 3.4.4 重组菌1628-GUS与T15-GUS及T62-GUS的构建 | 第50-55页 |
| 3.4.5 突变株1628-T15与1628-T62的蛋白质合成水平 | 第55页 |
| 3.5 讨论 | 第55-57页 |
| 4 AdpA_(sd)基因的过量表达对Streptomyces diastatochromogenes 1628-T62形态分化及合成丰加霉素的影响 | 第57-65页 |
| 4.1 引言 | 第57页 |
| 4.2 材料 | 第57-58页 |
| 4.2.1 菌种与质粒 | 第57页 |
| 4.2.2 培养基 | 第57页 |
| 4.2.3 主要试剂、工具酶、抗生素及使用浓度 | 第57页 |
| 4.2.4 引物设计 | 第57-58页 |
| 4.2.5 主要仪器 | 第58页 |
| 4.3 方法 | 第58-60页 |
| 4.3.1 adpA基因的扩增 | 第58页 |
| 4.3.2 割胶回收、连接、测序 | 第58页 |
| 4.3.3 大肠杆菌感受态的制备及DNA的转化 | 第58页 |
| 4.3.4 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第58页 |
| 4.3.5 酶切 | 第58-59页 |
| 4.3.6 大肠杆菌ET12567 (pUZ8002，pIB139-adpA_(sd))的准备 | 第59页 |
| 4.3.7 1628-T62菌株的准备 | 第59页 |
| 4.3.8 重组菌1628-T62A的构建 | 第59页 |
| 4.3.9 丰加霉素HPLC分析 | 第59页 |
| 4.3.10 生物量的测定 | 第59页 |
| 4.3.11 重组菌遗传稳定性的检测 | 第59页 |
| 4.3.12 重组菌1628-T62A与突变株1628-T62菌丝的观察 | 第59-60页 |
| 4.4 结果与分析 | 第60-64页 |
| 4.4.1 adpA_(sd)基因的克隆 | 第60页 |
| 4.4.2 重组载体pIB139-adpA_(sd)的构建 | 第60-61页 |
| 4.4.3 重组菌1628-T62A的构建 | 第61-62页 |
| 4.4.4 AdpA_(sd)过表达对突变株1628-T62的形态分化的影响 | 第62-63页 |
| 4.4.5 AdpA_(sd)基因的过表达对突变株1628-T62产TM的影响 | 第63-64页 |
| 4.5 讨论 | 第64-65页 |
| 5 总结、创新与展望 | 第65-67页 |
| 5.1 全文总结 | 第65页 |
| 5.2 创新点 | 第65-66页 |
| 5.3 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 作者简历 | 第74页 |
