| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 绪论 | 第17-28页 |
| 1.1 木霉菌的研究概况 | 第17-18页 |
| 1.2 木霉菌的的生防作用及生防机制 | 第18页 |
| 1.3 单端孢霉烯类化合物的主要性质 | 第18-23页 |
| 1.3.1 单端孢霉烯类化合物的分类 | 第18-19页 |
| 1.3.2 木霉素简介及其生防作用 | 第19-20页 |
| 1.3.3 单端孢霉烯类化合物的合成途径 | 第20-23页 |
| 1.4 真菌基因敲除研究进展 | 第23-26页 |
| 1.4.1 基因敲除载体构建方法 | 第24-25页 |
| 1.4.2 基因敲除载体的转化体系 | 第25-26页 |
| 1.5 研究内容及意义 | 第26-28页 |
| 1.5.1 研究的主要内容 | 第26-27页 |
| 1.5.2 研究的重要意义 | 第27-28页 |
| 2 脐孢木霉菌0248中tri基因簇的克隆与序列分析 | 第28-44页 |
| 2.1 实验材料及仪器 | 第28-29页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第28页 |
| 2.1.2 培养基及主要试剂 | 第28页 |
| 2.1.3 试剂盒、酶及耗材 | 第28-29页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第29页 |
| 2.2 方法 | 第29-34页 |
| 2.2.1 脐孢木霉菌0248的保藏与培养 | 第29-30页 |
| 2.2.2 脐孢木霉菌0248中总DNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.3 脐孢木霉菌0248中总RNA的提取及反转录 | 第30-31页 |
| 2.2.4 脐孢木霉菌0248中tri基因簇的克隆 | 第31-33页 |
| 2.2.5 基因簇的拼接及序列分析 | 第33-34页 |
| 2.3 tri基因在不同碳源培养下的差异表达分析 | 第34-35页 |
| 2.3.1 不同碳源培养下总cDNA的获取 | 第34页 |
| 2.3.2 不同碳源培养下tri基因表达量分析 | 第34-35页 |
| 2.3.3 不同碳源培养下木霉素产素水平分析 | 第35页 |
| 2.4 结果与分析 | 第35-41页 |
| 2.4.1 基因簇全长与序列分析 | 第35-36页 |
| 2.4.2 基因簇的同源性分析 | 第36-38页 |
| 2.4.3 不同产素水平下基因表达量的分析 | 第38-41页 |
| 2.4.4 木霉素产量分析 | 第41页 |
| 2.5 讨论 | 第41-44页 |
| 2.5.1 0248与苇状木霉菌tri基因簇之间有较高同源性 | 第41-42页 |
| 2.5.2 0248中木霉素产量与tri基因表达量呈正相关 | 第42-44页 |
| 3 脐孢木霉菌0248中tri3、tri11、tri4基因的分析与敲除 | 第44-63页 |
| 3.1 材料 | 第44-46页 |
| 3.1.1 菌株及质粒 | 第44页 |
| 3.1.2 培养基及主要试剂 | 第44-45页 |
| 3.1.3 试剂盒、酶及耗材 | 第45页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第45-46页 |
| 3.2 脐孢木霉菌0248中tri3、tri11、tri4基因序列分析 | 第46页 |
| 3.3 基因敲除载体的构建 | 第46-50页 |
| 3.3.1 基因敲除同源重组片段的构建 | 第46-49页 |
| 3.3.2 重组质粒的构建 | 第49-50页 |
| 3.4 农杆菌介导转化敲除tri3、tri11、tri4基因 | 第50-53页 |
| 3.4.1 农杆菌感受态制备 | 第50-51页 |
| 3.4.2 重组载体pKT3、pKT11、pKT4转化农杆菌 | 第51页 |
| 3.4.3 农杆菌介导tri3、tri11、tri4基因敲除片段转化0248基因组 | 第51-52页 |
| 3.4.4 tri3、tri11和tri4基因敲除突变体的验证 | 第52-53页 |
| 3.5 结果 | 第53-61页 |
| 3.5.1 脐孢木霉菌0248中tri3、tri11、tri4基因序列分析 | 第53-58页 |
| 3.5.2 tri3、tri11和tri4基因敲除载体的构建 | 第58-59页 |
| 3.5.3 从基因组水平验证tri3、tri11和tri4基因敲除转化株 | 第59-61页 |
| 3.6 讨论 | 第61-63页 |
| 3.6.1 融合PCR技术构建载体 | 第61-62页 |
| 3.6.2 无启动子终止子的潮霉素抗性基因有助于提高阳性克隆比例 | 第62-63页 |
| 4 脐孢木霉菌0248中tri3、tri11、tri4基因功能分析 | 第63-74页 |
| 4.1 材料 | 第63页 |
| 4.1.1 菌株及质粒 | 第63页 |
| 4.1.2 培养基及主要试剂 | 第63页 |
| 4.1.3 试剂盒、酶及耗材 | 第63页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第63页 |
| 4.2 方法 | 第63-64页 |
| 4.2.1 tri3、tri11和tri4基因敲除转化株的遗传稳定性分析 | 第63-64页 |
| 4.2.2 tri3、tri11和tri4基因敲除转化株中基因表达量分析 | 第64页 |
| 4.2.3 tri3、tri11和tri4基因敲除转化株中木霉素产量分析 | 第64页 |
| 4.3 结果 | 第64-71页 |
| 4.3.1 tri3、tri11和tri4基因敲除转化株具有遗传稳定性 | 第64-65页 |
| 4.3.2 tri3、tri11和tri4基因缺失影响tri基因的转录水平 | 第65-69页 |
| 4.3.3 tri3、tri11和tri4基因敲除对木霉素产量的影响 | 第69-71页 |
| 4.4 讨论 | 第71-74页 |
| 4.4.1 tri3基因编码蛋白催化木霉醇C-4位置羟基乙酰化 | 第71页 |
| 4.4.2 tri11基因编码蛋白催化EPT骨架上C-4位置的羟基化 | 第71-72页 |
| 4.4.3 tri4基因编码蛋白直接参与木霉素的合成 | 第72-74页 |
| 5 总结与展望 | 第74-76页 |
| 5.1 全文总结 | 第74-75页 |
| 5.2 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 作者简介 | 第84页 |
