| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 缩略词表 | 第17-18页 |
| 第一章 Sox9在胚胎发育、干细胞特化、成体组织和人类疾病中的研究概述(文献综述) | 第18-27页 |
| 1.1 引言 | 第18页 |
| 1.2 Sox蛋白家族简介 | 第18-20页 |
| 1.3 转录因子Sox9分子特征 | 第20-22页 |
| 1.3.1 Sox9的结构 | 第20-21页 |
| 1.3.2 转录后调控 | 第21页 |
| 1.3.3 Sox9-互作蛋白复合物 | 第21-22页 |
| 1.4 Sox9在三胚层发育中的作用 | 第22-24页 |
| 1.4.1 Sox9与中胚层发育 | 第22-23页 |
| 1.4.2 Sox9与外胚层发育 | 第23页 |
| 1.4.3 Sox9与内胚层发育 | 第23-24页 |
| 1.5 Sox9在成体组织中的功能 | 第24-25页 |
| 1.6 Sox9与疾病 | 第25-27页 |
| 1.6.1 Sox9与先天性发育障碍 | 第25页 |
| 1.6.2 Sox9与后天性疾病 | 第25-27页 |
| 第二章 阿尔巴斯绒山羊毛囊干细胞的体外分离鉴定 | 第27-44页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 材料 | 第27-29页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第27-28页 |
| 2.2.2 主要仪器设备 | 第28页 |
| 2.2.3 实验试剂、耗材 | 第28-29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-33页 |
| 2.3.1 毛囊干细胞标记在gHFSCs中的表达检测 | 第29页 |
| 2.3.2 细胞培养板的准备及分离培养gHFSCs | 第29页 |
| 2.3.3 gHFSCs的纯化及检测 | 第29-30页 |
| 2.3.4 细胞传代、冻存和绘制生长曲线 | 第30页 |
| 2.3.5 细胞免疫组化 | 第30页 |
| 2.3.6 实时定量PCR | 第30-32页 |
| 2.3.7 Western blot | 第32页 |
| 2.3.8 成骨、成软骨、成肌诱导分化及其鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.9 数据统计分析 | 第33页 |
| 2.4 结果 | 第33-42页 |
| 2.4.1 Krt15、Krt19、Krt14和CD34在gHF中的表达 | 第33-34页 |
| 2.4.2 gHFSCs形态特征 | 第34-35页 |
| 2.4.3 gHFSCs标记物细胞免疫组化鉴定 | 第35-36页 |
| 2.4.4 gHFSCs增殖能力鉴定 | 第36-37页 |
| 2.4.5 gHFSCs标记物RNA水平和蛋白水平的检测 | 第37-38页 |
| 2.4.6 gHFSCs定向分化能力验证 | 第38-40页 |
| 2.4.7 gHFSCs可形成球体结构 | 第40-42页 |
| 2.5 讨论 | 第42-43页 |
| 2.6 本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 阿尔巴斯绒山羊毛囊干细胞的多能性分析 | 第44-53页 |
| 3.1 引言 | 第44页 |
| 3.2 材料 | 第44页 |
| 3.2.1 细胞 | 第44页 |
| 3.2.2 主要仪器、耗材 | 第44页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第44页 |
| 3.3 实验方法 | 第44-46页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第45页 |
| 3.3.2 细胞免疫组化检测gHFSCs中干细胞多能因子的表达 | 第45页 |
| 3.3.3 流式细胞术分析Oct4、Nanog、Sox2在gHFSCs中的表达 | 第45页 |
| 3.3.4 gHFSCs中干细胞多能因子在RNA水平表达情况 | 第45页 |
| 3.3.5 gHFSCs中干细胞多能标记在蛋白水平表达情况 | 第45页 |
| 3.3.6 数据统计分析 | 第45-46页 |
| 3.4 结果 | 第46-50页 |
| 3.4.1 gHFSCs和gADSCs的细胞形态 | 第46页 |
| 3.4.2 多能因子在gHFSCs中的细胞免疫组化鉴定 | 第46-48页 |
| 3.4.3 流式细胞术检测Oct4,Nanog,Sox2在gHFSCs中的表达 | 第48页 |
| 3.4.4 多能因子在gHFSCs中RNA水平的表达情况 | 第48-49页 |
| 3.4.5 多能标记分子在gHFSCs中蛋白水平的表达情况 | 第49-50页 |
| 3.5 讨论 | 第50-52页 |
| 3.6 本章小结 | 第52-53页 |
| 第四章 Sox9在阿尔巴斯绒山羊毛囊干细胞中的功能 | 第53-68页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 材料 | 第53-54页 |
| 4.2.1 细胞 | 第53页 |
| 4.2.2 试剂耗材 | 第53-54页 |
| 4.3 实验方法 | 第54-57页 |
| 4.3.1 Sox9在GHF中的表达部位验证 | 第54页 |
| 4.3.2 Sox9在gHFSCs中表达情况检测 | 第54页 |
| 4.3.3 干扰Sox9表达的gHFSCs的获得 | 第54-56页 |
| 4.3.4 Sox9干扰后的细胞生长曲线 | 第56页 |
| 4.3.5 Sox9干扰后与细胞增殖凋亡相关基因的表达变化 | 第56页 |
| 4.3.6 干扰Sox9表达后对gHFSCs特异标记基因的影响 | 第56页 |
| 4.3.7 干扰Sox9表达后对干细胞多能因子的影响 | 第56页 |
| 4.3.8 gHFSCs钙诱导培养后Sox9的表达变化 | 第56页 |
| 4.3.9 数据统计分析 | 第56-57页 |
| 4.4 结果 | 第57-64页 |
| 4.4.1 Sox9在gHF和gHFSCs中的表达情况 | 第57-58页 |
| 4.4.2 干扰Sox9表达后的细胞形态变化 | 第58-59页 |
| 4.4.3 干扰Sox9表达后,gHFSCs增殖受阻,出现分化现象 | 第59-61页 |
| 4.4.4 干扰Sox9表达后,gHFSCs特异标记表达减少 | 第61-62页 |
| 4.4.5 干扰Sox9表达后,gHFSCs中多能因子几乎不再表达 | 第62-63页 |
| 4.4.6 钙诱导分化后Sox9表达量减少,终末分化标记Lor表达量增多 | 第63-64页 |
| 4.5 讨论 | 第64-66页 |
| 4.6 本章小结 | 第66-68页 |
| 第五章 转录因子Sox9在阿尔巴斯绒山羊毛囊干细胞中互作基因的分析 | 第68-82页 |
| 5.1 引言 | 第68页 |
| 5.2 材料 | 第68-69页 |
| 5.2.1 细胞 | 第68页 |
| 5.2.2 试剂 | 第68-69页 |
| 5.3 实验方法 | 第69-72页 |
| 5.3.1 细胞培养 | 第69页 |
| 5.3.2 ChIP实验 | 第69-71页 |
| 5.3.3 测序及ChIP-seq数据分析流程 | 第71-72页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第72-80页 |
| 5.4.1 ChIP质检和ChIP-seq | 第72页 |
| 5.4.2 在gHFSCs中可与Sox9结合的所有基因 | 第72-77页 |
| 5.4.3 基序扫描 | 第77-78页 |
| 5.4.4 KEGG通路分析 | 第78-80页 |
| 5.5 本章小结 | 第80-82页 |
| 结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第90页 |
