中文摘要 | 第1-8页 |
Abstract | 第8-10页 |
前言 | 第10-14页 |
一、研究背景 | 第10-13页 |
二、本研究的目的和意义 | 第13-14页 |
第一部分 CpG-ODN 对PBMC 与HepG2 共孵育过程的作用 | 第14-30页 |
引言 | 第14页 |
1. 材料 | 第14-17页 |
·质粒、菌株和细胞等 | 第14页 |
·主要试剂 | 第14-15页 |
·主要试剂的配制 | 第15-16页 |
·主要仪器设备 | 第16-17页 |
2. 方法 | 第17-24页 |
·CpG-ODN 质粒的大量制备,鉴定与浓度测定 | 第17-19页 |
·肿瘤细胞复苏与培养 | 第19页 |
·人外周血单个核细胞(PBMC)的分离,培养与活化 | 第19-20页 |
·肿瘤细胞的接种及培养 | 第20-21页 |
·活化的人外周血单个核细胞与肿瘤细胞的共孵育 | 第21页 |
·目的基因的检测 | 第21-24页 |
3. 结果 | 第24-28页 |
·质粒的酶切电泳鉴定 | 第24页 |
·质粒的OD 值测定 | 第24-25页 |
·HepG2 细胞培养 | 第25页 |
·总RNA 电泳图 | 第25页 |
·MyD88、Caspase-8 的PCR 检测 | 第25-28页 |
·MyD88 基因的测序和序列比对 | 第28页 |
4. 讨论 | 第28-30页 |
第二部分 CpG-ODN 对TLR9 阳性表达细胞的作用 | 第30-38页 |
引言 | 第30页 |
1. 材料 | 第30-31页 |
2. 方法 | 第31-32页 |
·引物的设计与合成 | 第31页 |
·CpG-ODN 对PBMC 的作用 | 第31-32页 |
·CpG-ODN 对HepG2 的作用 | 第32页 |
3. 结果 | 第32-36页 |
·PBMC 中Bcl-xL、Bid 的PCR 检测 | 第32-33页 |
·HepG2 中Bcl-xL、Bid、TLR9、Bcl-2 的PCR 检测 | 第33-35页 |
·不同寡脱氧核苷酸对HepG2 中Bid 表达的影响 | 第35页 |
·Bcl-xL 和Bid 基因的测序和序列比对 | 第35-36页 |
4. 讨论 | 第36-38页 |
第三部分 CpG-ODN 的安全性评价研究 | 第38-46页 |
引言 | 第38页 |
1. 材料 | 第38-39页 |
·主要试剂 | 第38页 |
·主要试剂的配制 | 第38页 |
·主要仪器设备 | 第38-39页 |
2. 方法 | 第39-40页 |
·HepG2 的孔板接种及培养 | 第39页 |
·CpG-ODN 直接刺激HepG2 及流式检测 | 第39-40页 |
·数据处理 | 第40页 |
3. 结果 | 第40-44页 |
·不同浓度 CpG-ODN 对正常状态 HepG2 细胞周期的影响 | 第40-42页 |
·不同浓度 CpG-ODN 对不良状态 HepG2 细胞周期的影响 | 第42-44页 |
4. 讨论 | 第44-46页 |
参考文献 | 第46-53页 |
全文总结 | 第53-54页 |
附录一 测序图谱 | 第54-59页 |
附录二 英文缩略词表 | 第59-60页 |
附录三 文献综述 | 第60-67页 |
附录四 攻读学位期间发表的论文 | 第67-68页 |
致谢 | 第68页 |