| 致谢 | 第5-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-17页 |
| 1 绪论 | 第17-33页 |
| 1.1 核小体结构 | 第17-18页 |
| 1.2 组蛋白修饰是表观遗传学的重要内容 | 第18-22页 |
| 1.3 组蛋白H3泛素化修饰 | 第22-23页 |
| 1.4 蛋白质泛素化系统 | 第23-25页 |
| 1.5 DCAF是CRL4泛素化底物过程中重要的环节 | 第25-26页 |
| 1.6 肝脏内胚胎发育相关基因的表达与调控机制 | 第26-27页 |
| 1.7 肝脏发育调控的研究现状 | 第27-29页 |
| 1.7.1 胚胎时期肝脏发育受多种转录因子和细胞通路调控 | 第27-28页 |
| 1.7.2 个体出生后肝脏的发育调控研究现状 | 第28-29页 |
| 1.8 表观遗传学在肝脏发育调控中的功能 | 第29-30页 |
| 1.9 Crispr/cas9构建基因敲除稳定遗传细胞系 | 第30-31页 |
| 1.10 本课题解决的科学问题 | 第31-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-61页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-43页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第33页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第33-35页 |
| 2.1.3 细胞系 | 第35页 |
| 2.1.4 抗体 | 第35-36页 |
| 2.1.5 质粒和细菌 | 第36页 |
| 2.1.6 实验仪器 | 第36-38页 |
| 2.1.7 相关溶液配制 | 第38-40页 |
| 2.1.8 引物序列 | 第40-43页 |
| 2.2 实验方法 | 第43-61页 |
| 2.2.1 小鼠基因型鉴定 | 第43-44页 |
| 2.2.2 基因表达载体的构建 | 第44页 |
| 2.2.3 细胞培养 | 第44-45页 |
| 2.2.4 细胞转染 | 第45-46页 |
| 2.2.5 RNAi技术 | 第46页 |
| 2.2.6 RNA提取,逆转录以及荧光定量PCR(Q-PCR)技术 | 第46-48页 |
| 2.2.7 Western Blotting | 第48-51页 |
| 2.2.8 蛋白质免疫共沉淀技术 | 第51页 |
| 2.2.9 细胞染色技术 | 第51-54页 |
| 2.2.10 电子显微镜成像 | 第54页 |
| 2.2.11 原代肝细胞分离及培养 | 第54-55页 |
| 2.2.12 染色质免疫共沉淀分析(ChIP) | 第55-56页 |
| 2.2.13 组蛋白提取 | 第56页 |
| 2.2.14 质谱分析 | 第56-57页 |
| 2.2.15 核小体占位(nucleosome occupancy)分析 | 第57页 |
| 2.2.16 CpG岛甲基化分析 | 第57页 |
| 2.2.17 病毒包装及稳定细胞系构建 | 第57-58页 |
| 2.2.18 质粒的大规模抽提 | 第58-60页 |
| 2.2.19 统计学处理 | 第60-61页 |
| 3 实验结果 | 第61-92页 |
| 3.1 肝脏中组蛋白H3可被泛素化 | 第61-63页 |
| 3.2 组蛋白H3在肝脏中的泛素化过程由CRL4催化 | 第63-65页 |
| 3.3 DCAF8是连接CRL4和组蛋白H3的接头蛋白 | 第65-70页 |
| 3.4 组蛋白H3泛素化发生在H3K79位点 | 第70-73页 |
| 3.5 H3K79泛素化特异性抗体的制备及验证 | 第73-74页 |
| 3.6 CRL4~(DCAF8)的失活重新激活肝脏中发育相关基因的表达 | 第74-77页 |
| 3.7 个体发育过程中,依赖于CRL4~(DCAF8)的组蛋白H3的泛素化逐渐增强,抑制 了肝脏发育相关基因的表达 | 第77-79页 |
| 3.8 不同肝癌细胞系中肝脏发育相关基因的表达和组蛋白H3泛素化水平具有相关性 | 第79-81页 |
| 3.9 肝癌细胞系中肝脏发育相关基因的表达受依赖于CRL4~(DCAF8)的H3泛素化调控 | 第81-83页 |
| 3.10 部分临床肝癌肝癌患者的癌组织比癌旁组织组蛋白H3泛素化水平低 | 第83-85页 |
| 3.11 组蛋白H3泛素化通过改变基因启动子区域H3K9甲基化水平调控基因表达 | 第85-88页 |
| 3.12 H3K79泛素化下降导致肝细胞衰老 | 第88-92页 |
| 4 结论及意义 | 第92-93页 |
| 5 讨论 | 第93-97页 |
| 5.1 CRL4~(DCAF8)泛素化组蛋白H3 | 第93-94页 |
| 5.2 H3K79泛素化与H3K9甲基化的相互影响 | 第94页 |
| 5.3 H3K79泛素化促进肝脏成熟 | 第94-95页 |
| 5.4 DCAF8可能是在细胞中潜在的癌基因 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-105页 |
| 作者简历及在读期间所取得的科研成果 | 第105页 |
