| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-16页 |
| 缩写表 | 第16-20页 |
| 第一部分 SLPI基因敲除和敲入小鼠细胞模型的建立 | 第20-65页 |
| 第一章 绪论 | 第20-25页 |
| ·牙齿和牙本质发育的研究进展 | 第20-22页 |
| ·研究目的 | 第22-25页 |
| 第二章 鼠源SLPI基因过表达载体的构建 | 第25-39页 |
| ·实验材料 | 第25-28页 |
| ·载体、菌株 | 第25页 |
| ·主要实验仪器与材料 | 第25页 |
| ·主要实验药品 | 第25-26页 |
| ·主要试剂配制 | 第26-28页 |
| ·实验方法与步骤 | 第28-36页 |
| ·鼠源SLPI的cDNA的获得 | 第28-29页 |
| ·引物设计 | 第29-30页 |
| ·SLPI基因过表达载体构建 | 第30-36页 |
| ·pUC57-SLPI质粒和pCMV6-AC-GFP质粒的提取 | 第30-31页 |
| ·SLPI片段的PCR | 第31-32页 |
| ·PCR产物纯化 | 第32页 |
| ·SLPI片段和pCMV6-AC-GFP空载质粒的双酶切 | 第32-33页 |
| ·胶回收双酶切后的SLPI和pCMV6-AC-GFP | 第33-34页 |
| ·SLPI片段与pCMV6-AC-GFP的酶切 | 第34-35页 |
| ·重组载体pCMV6-SLPI(+)-GFP的转化 | 第35页 |
| ·菌落PCR、酶切验证及测序保菌 | 第35-36页 |
| ·实验结果 | 第36-39页 |
| ·鼠源SLPI基因PCR结果 | 第36页 |
| ·菌落PCR鉴定重组质粒pCMV6-SLPI(+)-GFP | 第36-37页 |
| ·双酶切验证重组质粒pCMV6-SLPI(+)-GFP | 第37-38页 |
| ·重组质粒pCMV6-SLPI(+-GFP测序结果 | 第38-39页 |
| 第三章 鼠源SLPI沉默载体的构建 | 第39-47页 |
| ·实验材料 | 第39-42页 |
| ·载体、菌株 | 第39页 |
| ·主要实验仪器与材料 | 第39页 |
| ·主要实验药品 | 第39-40页 |
| ·主要试剂配制 | 第40-42页 |
| ·实验方法 | 第42-46页 |
| ·鼠源SLPI的siRNA设计 | 第42-43页 |
| ·pSUPER.puro载体 | 第43-44页 |
| ·pSUPER.puro载体（图谱来源于Origene公司官网） | 第43-44页 |
| ·pSUPER.puro载体表达过程 | 第44页 |
| ·将siRNA序列连接到载体pSUPER.puro上 | 第44-46页 |
| ·pSUPER.puro质粒的转化 | 第44页 |
| ·pSUPER.puro质粒摇菌 | 第44页 |
| ·pSUPER.puro菌液保菌 | 第44-45页 |
| ·pSUPER.puro质粒小提 | 第45页 |
| ·siRNA引物的退火连接 | 第45页 |
| ·pSUPER.puro载体的双酶切 | 第45页 |
| ·胶回酶切后的pSUPER.puro收线性DNA | 第45-46页 |
| ·连接反应 | 第46页 |
| ·表达载体pSUPER-SLPI-siRNA的转化 | 第46页 |
| ·摇菌、保菌及测序 | 第46页 |
| ·实验结果与讨论 | 第46-47页 |
| ·测序结果 | 第46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 SLPI基因过表达和沉默动物模型的构建 | 第47-64页 |
| ·实验材料 | 第47-50页 |
| ·小鼠 | 第47页 |
| ·主要实验仪器与材料 | 第47页 |
| ·主要实验药品 | 第47-48页 |
| ·主要试剂配制 | 第48-50页 |
| ·实验方法 | 第50-60页 |
| ·SLPI敲入小鼠模型的构建 | 第50-58页 |
| ·SLPI敲入小鼠的获得 | 第50-54页 |
| ·SLPI敲入小鼠的检测 | 第54-56页 |
| ·SLPI敲入小鼠的建系 | 第56-58页 |
| ·SLPI敲除小鼠模型的构建 | 第58-59页 |
| ·SLPI敲除小鼠的检测 | 第58-59页 |
| ·SLPI敲出小鼠饲养 | 第59页 |
| ·SLPI敲出小鼠饲养的繁殖 | 第59页 |
| ·牙胚细胞的原代培养 | 第59-60页 |
| ·培养过程如下 | 第59-60页 |
| ·实验结果 | 第60-64页 |
| ·SLPI敲入小鼠亲本的检测结果 | 第60-61页 |
| ·SLPI敲入小鼠建系结果 | 第61-62页 |
| ·SLPI敲除小鼠亲本检测结果 | 第62-63页 |
| ·SLPI基因敲除小鼠牙胚细胞的原代培养结果 | 第63页 |
| ·野生型小鼠牙胚细胞的原代培养结果 | 第63-64页 |
| 第五章 第一部分小结 | 第64-65页 |
| 第二部分 SLPI促进U2-OS细胞迁移的分子机制研究 | 第65-118页 |
| 第一章 绪论 | 第65-67页 |
| 第二章 pCMV6-SLPI-GFP和pCMV6-AC-GFP单克隆细胞系的构建 | 第67-98页 |
| ·实验材料 | 第67-73页 |
| ·菌种、载体和细胞 | 第67页 |
| ·主要实验仪器与材料 | 第67-68页 |
| ·主要实验药品 | 第68-69页 |
| ·主要试剂配制 | 第69-73页 |
| ·实验方法与步骤 | 第73-93页 |
| ·人源SLPI基因的获得 | 第73-78页 |
| ·引物设计 | 第73-74页 |
| ·U2OS细胞的培养 | 第74-76页 |
| ·U2OS细胞总RNA的提取 | 第76页 |
| ·逆转录反应 | 第76-77页 |
| ·PCR反应 | 第77-78页 |
| ·PCR产物纯化 | 第78页 |
| ·pCMV6-SLPI-GFP载体的构建 | 第78-84页 |
| ·pCMV6-AC-GFP质粒的提取 | 第78-79页 |
| ·SLPI片段和pCMV6-AC-GFP质粒的双酶切 | 第79-80页 |
| ·胶回酶切后的SLPI和pCMV6-AC-GFP的片段 | 第80-81页 |
| ·SLPI片段与pCMV6-AC-GFP片段的链接 | 第81-82页 |
| ·重组载体pCMV6-SLPI-GFP的转化 | 第82页 |
| ·菌落PCR、酶切验证及测序保菌 | 第82页 |
| ·pCMV6-SLPI-GFP和pCMV6-AC-GFP去内毒素质粒提取 | 第82-84页 |
| ·pCMV6-SLPI-GFP和pCMV6-AC-GFP单克隆细胞系 | 第84-93页 |
| ·细胞培养 | 第84页 |
| ·质粒pCMV6-SLPI-GFP和pCMV6-AC-GFP转染U20S细胞 | 第84-88页 |
| ·挑单克隆 | 第88-89页 |
| ·蛋白免疫印迹(Western blot)检测 | 第89-93页 |
| ·结果与讨论 | 第93-98页 |
| ·U2OS细胞提取总RNA结果 | 第93-94页 |
| ·人源SLPI基因PCR结果 | 第94页 |
| ·菌落PCR鉴定重组质粒pCMV6-SLPI-GFP | 第94-95页 |
| ·双酶切验证重组质粒pCMV6-SLPI-GFP | 第95页 |
| ·重组质粒pCMV6-SLPI-GFP测序结果 | 第95-96页 |
| ·单克隆细胞系Western blot的测结果 | 第96-98页 |
| 第三章 SLPI siRNA干扰U2OS细胞内源性SLPI表达条件的确定 | 第98-105页 |
| ·实验材料 | 第98-101页 |
| ·细胞 | 第98页 |
| ·主要实验仪器与材料 | 第98页 |
| ·主要实验药品 | 第98-99页 |
| ·主要试剂配制 | 第99-101页 |
| ·实验方法与步骤 | 第101-103页 |
| ·siRNA序列 | 第101页 |
| ·不同浓度siRNA对干扰效果的影响 | 第101-102页 |
| ·细胞培养 | 第101页 |
| ·siRNA转染 | 第101-102页 |
| ·PCR检测不同浓度siRNA对干扰效果 | 第102页 |
| ·Western Blot检测不同浓度siRNA对干扰效果 | 第102页 |
| ·不同转染时间对干扰效果的影响 | 第102-103页 |
| ·细胞培养 | 第102页 |
| ·siRNA转染 | 第102页 |
| ·Western Blot检测不同转染时间对干扰效果 | 第102-103页 |
| ·结果与讨论 | 第103-105页 |
| ·不同浓度siRNA干扰内源性SLPI的PCR检测结果 | 第103页 |
| ·不同浓度siRNA干扰内源性SLPI的Western Blot检测结果 | 第103-104页 |
| ·siRNA不同转染时间干扰内源性SLPI的Western Blot检测结果 | 第104页 |
| ·讨论与小结 | 第104-105页 |
| 第四章 迁移实验确定对U2OS细胞迁移的影响 | 第105-110页 |
| ·实验材料 | 第105-107页 |
| ·细胞 | 第105页 |
| ·主要实验仪器与材料 | 第105页 |
| ·主要实验药品 | 第105-106页 |
| ·主要试剂配制 | 第106-107页 |
| ·实验方法与步骤 | 第107-108页 |
| ·实验组设置 | 第107-108页 |
| ·实验步骤 | 第108页 |
| ·结果与讨论 | 第108-110页 |
| 第五章 具体机制研究 | 第110-117页 |
| ·实验材料 | 第110-112页 |
| ·细胞 | 第110页 |
| ·主要实验仪器与材料 | 第110页 |
| ·主要实验药品 | 第110-111页 |
| ·主要试剂配制 | 第111-112页 |
| ·实验过程与步骤 | 第112-115页 |
| ·实验组设置 | 第112-113页 |
| ·Western Blot验证 | 第113页 |
| ·细胞培养 | 第113页 |
| ·siRNA转染 | 第113页 |
| ·Western Blot检测 | 第113页 |
| ·明胶酶谱验证 | 第113-115页 |
| ·细胞培养 | 第113页 |
| ·siRNA转染 | 第113页 |
| ·明胶酶谱验证检测 | 第113-115页 |
| ·结果与讨论 | 第115-117页 |
| ·Western Blot结果 | 第115页 |
| ·明胶酶谱结果 | 第115-117页 |
| 第六章 第二部分小结 | 第117-118页 |
| 参考文献 | 第118-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第124-125页 |
| 附录B 其他需要说明的内容 | 第125页 |
