| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-22页 |
| ·透明质酸研究概况 | 第11-13页 |
| ·透明质酸简介 | 第11-12页 |
| ·透明质酸的应用 | 第12页 |
| ·在食品工业的应用 | 第12页 |
| ·在化妆品工业的应用 | 第12页 |
| ·在医药工业的应用 | 第12页 |
| ·中低分子量透明质酸及寡聚透明质酸的制备 | 第12-13页 |
| ·物理法 | 第12页 |
| ·化学法 | 第12-13页 |
| ·酶解法 | 第13页 |
| ·透明质酸酶研究现状 | 第13-18页 |
| ·透明质酸酶概述 | 第13-14页 |
| ·透明质酸酶的分类 | 第14-15页 |
| ·细菌透明质酸酶的研究进展 | 第15页 |
| ·细菌透明质酸酶的生理结构特点 | 第15-16页 |
| ·透明质酸酶酶活检测方法 | 第16-17页 |
| ·透明质酸酶的应用 | 第17-18页 |
| ·辅助药物 | 第17页 |
| ·癌症治疗 | 第17页 |
| ·临床手术 | 第17页 |
| ·受精作用 | 第17-18页 |
| ·HA制备 | 第18页 |
| ·包涵体简介 | 第18-20页 |
| ·包涵体的形成原因 | 第18-19页 |
| ·包涵体的理化性质 | 第19页 |
| ·包涵体蛋白的成因 | 第19-20页 |
| ·细胞表面展示技术研究现状 | 第20-21页 |
| ·细菌细胞表面展示技术概述 | 第20-21页 |
| ·冰晶核蛋白研究进展 | 第21页 |
| ·冰晶核蛋白的结构和功能 | 第21页 |
| ·冰晶核蛋白的细胞表面展示 | 第21页 |
| ·本研究立题意义 | 第21-22页 |
| 第2章 重组透明质酸酶表达菌株MF105的构建 | 第22-36页 |
| ·材料 | 第22-25页 |
| ·质粒及菌株 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22-24页 |
| ·本章所用试剂 | 第22-24页 |
| ·本章所需其它试剂的配制 | 第24页 |
| ·实验仪器 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-28页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第25页 |
| ·PCR及PCR产物的纯化 | 第25-26页 |
| ·质粒的提取 | 第26-27页 |
| ·DNA的体外重组 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及重组质粒的转化 | 第27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳的凝胶回收 | 第27-28页 |
| ·重组菌的升温诱导表达 | 第28页 |
| ·SDS-PAGE | 第28页 |
| ·软件和网站 | 第28页 |
| ·结果 | 第28-34页 |
| ·兽疫链球菌MF002透明质酸酶基因的克隆 | 第28-29页 |
| ·hyl基因序列以及HAase氨基酸序列的分析 | 第29-31页 |
| ·重组质粒pMF005的构建及转化 | 第31-33页 |
| ·重组HAase在MF105中的表达 | 第33-34页 |
| ·重组HAase在MF105中诱导温度优化 | 第33-34页 |
| ·重组菌MF105中HAase的表达对菌体生长的影响 | 第34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| 第3章 重组HAase包涵体的复性及其酶学性质 | 第36-46页 |
| ·材料 | 第36-38页 |
| ·菌株 | 第36页 |
| ·培养基 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36-38页 |
| ·本章所用试剂 | 第36-37页 |
| ·本章其他试剂的配制 | 第37-38页 |
| ·实验仪器 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-40页 |
| ·重组HAase包涵体的制备 | 第38页 |
| ·包涵体的变性及复性 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE方法 | 第38页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第38-39页 |
| ·DNS法测定酶活 | 第39页 |
| ·最适反应pH值及pH稳定性测定 | 第39-40页 |
| ·最适反应温度及稳定性测定 | 第40页 |
| ·粘度法测定HA的分子量 | 第40页 |
| ·结果 | 第40-45页 |
| ·Brandford法及DNS法的标准曲线 | 第40-41页 |
| ·重组HAase包涵体的变性、复性及透析结果 | 第41-42页 |
| ·重组HAase的酶反应条件优化 | 第42-44页 |
| ·重组HAase的最适反应温度、pH及其稳定性 | 第42-43页 |
| ·金属离子对重组HAase的影响 | 第43-44页 |
| ·重组HAase与HA反应过程中HA分子量的变化 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 第4章 温敏型HAase大肠杆菌表面展示体系的构建及酶活测定 | 第46-56页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·质粒及菌株 | 第46页 |
| ·培养基 | 第46-47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·本章所用试剂 | 第47页 |
| ·本章所需其他试剂的配制 | 第47页 |
| ·实验仪器 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-49页 |
| ·PCR方法 | 第47-48页 |
| ·western-blot方法 | 第48页 |
| ·使用DNS法测定HAase表面展示体系的酶活力 | 第48-49页 |
| ·HAase表面展示体系的最适反应pH、温度及其稳定性检测 | 第49页 |
| ·HA分子量的测定 | 第49页 |
| ·结果 | 第49-54页 |
| ·inaq-n以及hyl基因的克隆 | 第49-50页 |
| ·温敏型表面展示HAase载体pMF006的构建及其转化 | 第50-51页 |
| ·HAase在MF106重组菌中的表达 | 第51-52页 |
| ·InaQ-N-HAase蛋白的表达 | 第51-52页 |
| ·InaQ-N-HAase融合蛋白表达对菌体生长的影响 | 第52页 |
| ·HAase表面展示条件的优化及HA降解效果测定 | 第52-54页 |
| ·HAase表面展示体系降解HA的最适反应条件及其稳定性 | 第52-53页 |
| ·HAase表面展示体系降解HA活性 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| ·HAase表面展示体系的构建及应用 | 第54页 |
| ·HAase表面展示体系与胞内表达重组HAase的比较 | 第54-56页 |
| 第5章 总结 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 附录 | 第64-66页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
