| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| 1 转基因动物制备的主要方法 | 第12-14页 |
| ·显微注射法 | 第12页 |
| ·体细胞核移植 | 第12-13页 |
| ·逆转录病毒感染法 | 第13页 |
| ·胚胎干细胞法 | 第13页 |
| ·人工酵母染色体(YAC)法 | 第13-14页 |
| ·精子载体法 | 第14页 |
| 2 外源基因在转基因动物中表达和遗传的稳定性 | 第14-17页 |
| ·位置效应 | 第15页 |
| ·外源基因的表观遗传学修饰 | 第15-16页 |
| ·外源基因遗传的稳定性 | 第16-17页 |
| 3 结语 | 第17-19页 |
| 第二章 VEGF转基因绒山羊阳性鉴定及拷贝数测定 | 第19-35页 |
| 1 实验材料 | 第21-22页 |
| ·实验仪器 | 第21页 |
| ·实验试剂与耗材 | 第21页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-29页 |
| ·PCR转基因阳性鉴定 | 第22-25页 |
| ·血液基因组DNA提取 | 第22-23页 |
| ·PCR引物设计 | 第23-24页 |
| ·PCR反应体系 | 第24-25页 |
| ·PCR产物电泳 | 第25页 |
| ·凝胶成像 | 第25页 |
| ·绝对定量PCR法检测转基因绒山羊外源基因拷贝数 | 第25-29页 |
| ·绝对定量PCR反应标准品制备 | 第25-26页 |
| ·制作绝对定量PCR标准曲线 | 第26页 |
| ·质粒提取 | 第26-27页 |
| ·绝对定量PCR引物设计 | 第27页 |
| ·实时定量PCR反应体系及反应程序 | 第27-29页 |
| 3 实验结果 | 第29-33页 |
| ·PCR鉴定结果 | 第29-30页 |
| ·绝对定量PCR检测结果 | 第30-33页 |
| ·绝对定量PCR结果 | 第30-32页 |
| ·拷贝数检测结果 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 VEGF转基因绒山羊外源基因表达量检测 | 第35-49页 |
| 1 实验材料 | 第36-37页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·实验试剂与耗材 | 第36页 |
| ·实验液体配制 | 第36-37页 |
| 2 实验方法 | 第37-43页 |
| ·Real-time-PCR检测皮肤及血液RNA表达量 | 第37-40页 |
| ·皮肤组织RNA提取 | 第37-38页 |
| ·血液RNA提取 | 第38页 |
| ·RT-PCR(reverse transcription PCR) | 第38-39页 |
| ·PCR引物设计 | 第39页 |
| ·Real-time-PCR反应体系 | 第39-40页 |
| ·Western blot检测皮肤及血液VEGF蛋白表达量 | 第40-43页 |
| ·皮肤组织蛋白质的提取 | 第40-41页 |
| ·血液组织蛋白质的提取 | 第41页 |
| ·Western blot检测VEGF蛋白表达量 | 第41-43页 |
| 3 实验结果 | 第43-47页 |
| ·Real-time-PCR检测结果 | 第43-45页 |
| ·Real-time-PCR产物特异性检测 | 第43页 |
| ·Real-time-PCR检测皮肤组织mRNA表达量 | 第43-44页 |
| ·Real-time-PCR检测血液mRNA表达量 | 第44-45页 |
| ·Western blot检测结果 | 第45-47页 |
| ·Western blot检测皮肤组织蛋白表达量 | 第45-46页 |
| ·Western blot检测血液蛋白表达量 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
