| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-26页 |
| ·阿维菌素类药物 | 第11-14页 |
| ·阿维菌素类药物简介 | 第11页 |
| ·阿维菌素 | 第11-12页 |
| ·伊维菌素 | 第12-13页 |
| ·多拉菌素 | 第13-14页 |
| ·埃普利诺菌素 | 第14页 |
| ·多拉菌素的化学结构和理化性质 | 第14-16页 |
| ·多拉菌素的化学结构 | 第14-15页 |
| ·多拉菌素的理化性质 | 第15-16页 |
| ·多拉菌素的突变生物合成 | 第16-19页 |
| ·多拉菌素生物合成基因簇 | 第16页 |
| ·多拉菌素生物合成途径 | 第16-19页 |
| ·阿维链霉菌的遗传改造 | 第19-21页 |
| ·产阿维菌素有效组分突变株的构建 | 第19-20页 |
| ·产多拉菌素工程菌株的构建 | 第20-21页 |
| ·多拉菌素的抗虫作用机理 | 第21-22页 |
| ·多拉菌素的抗虫谱 | 第22页 |
| ·多拉菌素在兽医临床上的应用 | 第22-24页 |
| ·治疗猪寄生虫病中的应用 | 第23页 |
| ·治疗牛寄生虫病中的应用 | 第23页 |
| ·治疗羊寄生虫病中的应用 | 第23-24页 |
| ·DNA的磷硫酰化修饰 | 第24页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 2 实验材料和方法 | 第26-41页 |
| ·实验材料 | 第26-33页 |
| ·菌株 | 第26-27页 |
| ·质粒 | 第27-28页 |
| ·引物序列 | 第28-29页 |
| ·培养基 | 第29-30页 |
| ·化学试剂 | 第30-32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32-33页 |
| ·分子生物学软件及相关软件 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-41页 |
| ·菌种的培养和保藏 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第34页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA的少量快速提取及检测 | 第34页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌电转感受态细胞的制备与高压电穿孔法转化 | 第35-36页 |
| ·目标DNA的PCR扩增 | 第36页 |
| ·DNA的限制性内切酶酶切反应 | 第36-37页 |
| ·DNA的琼脂糖凝胶电泳 | 第37页 |
| ·DNA片段切胶回收 | 第37页 |
| ·DNA的连接反应 | 第37-38页 |
| ·DNA测序 | 第38页 |
| ·全基因合成技术 | 第38页 |
| ·链霉菌总DNA的少量提取 | 第38页 |
| ·双亲本介导的质粒DNA跨菌属间接合转移 | 第38-39页 |
| ·双交换基因置换或基因缺失菌株的鉴定 | 第39页 |
| ·阿维链霉菌的摇瓶发酵 | 第39-40页 |
| ·高压液相色谱(HPLC)多拉菌素发酵单位的测定 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-74页 |
| ·bkdFGH基因缺失突变株的构建与多拉菌素突变生物合成 | 第41-53页 |
| ·bkdFGH基因生物信息学分析 | 第41页 |
| ·bkdFGH基因缺失同源臂PCR引物设计 | 第41-42页 |
| ·基因缺失同源交臂的PCR扩增及T-A克隆 | 第42-43页 |
| ·bkdFGH基因缺失重组质粒pWHU1813 的构建 | 第43-47页 |
| ·bkdFGH基因缺失供体菌的构建 | 第47-48页 |
| ·同源双交换法缺失bkdFGH基因簇 | 第48-49页 |
| ·bkdFGH基因缺失突变株的筛选 | 第49页 |
| ·bkdFGH基因缺失突变株的验证 | 第49-50页 |
| ·bkdFGH基因缺失突变株多拉菌素突变生物合成 | 第50-53页 |
| ·aveD基因缺失突变株的构建与发酵检测 | 第53-62页 |
| ·aveD基因的生物学功能 | 第53-54页 |
| ·aveD基因的生物信息学分析 | 第54页 |
| ·aveD基因缺失同源交臂PCR引物设计 | 第54-55页 |
| ·aveD基因缺失同源交臂的PCR扩增及T-A克隆 | 第55-56页 |
| ·aveD基因缺失重组质粒pWHU1814 的构建 | 第56-58页 |
| ·aveD基因缺失供体菌的构建及导入 | 第58页 |
| ·同源双交换法缺失aveD基因 | 第58页 |
| ·aveD基因缺失突变株的筛选与验证 | 第58-61页 |
| ·aveD基因缺失突变株多拉菌素发酵检测 | 第61-62页 |
| ·突变aveC~*的过量表达及发酵检测 | 第62-67页 |
| ·aveC基因的功能 | 第62-63页 |
| ·定点突变aveC~*基因的合成 | 第63-64页 |
| ·aveC~*基因整合型重组质粒pWHU1815 的构建 | 第64页 |
| ·重组质粒pWHU1815 的导入 | 第64-65页 |
| ·aveC~*基因整合型突变株的验证 | 第65-66页 |
| ·aveC~*基因整合型突变株多拉菌素发酵 | 第66-67页 |
| ·多拉菌素突变生物合成发酵条件的优化 | 第67-72页 |
| ·多拉菌素发酵放罐时间的选取 | 第67-68页 |
| ·培养基的单一氮源测试试验 | 第68-69页 |
| ·复合氮源对多拉菌素生物合成的影响 | 第69-70页 |
| ·无机盐离子对多拉菌素生物合成的影响 | 第70-71页 |
| ·磷酸盐浓度对多拉菌素生物合成的影响 | 第71-72页 |
| ·DNA的磷硫酰化修饰对链霉菌抗生素产量的影响 | 第72-74页 |
| ·阿维链霉菌的DNA磷硫酰化修饰和限制基因簇 | 第72-73页 |
| ·SavA-SavH基因簇缺失载体的构建 | 第73页 |
| ·重组载体pWHU1816 的导入 | 第73-74页 |
| 4 讨论 | 第74-76页 |
| ·bkdFGH基因缺失突变株的构建及发酵检测 | 第74页 |
| ·aveD基因缺失突变株的构建及发酵检测 | 第74-75页 |
| ·突变aveC~*基因整合型突变株的构建及发酵检测 | 第75页 |
| ·多拉菌素合成发酵条件的优化 | 第75-76页 |
| 5 实验结论与创新点 | 第76-77页 |
| ·实验结论 | 第76页 |
| ·实验创新点 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
