| 符号说明 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一部分 文献综述 膜融合机制的研究进展 | 第13-27页 |
| 1 历史回顾 | 第13-14页 |
| 2 病毒的膜融合机制 | 第14-16页 |
| ·Ⅰ型病毒的膜融合相关机制 | 第14-16页 |
| ·Ⅱ型病毒的膜融合相关机制 | 第16页 |
| 3 体细胞膜融合机制 | 第16-18页 |
| 4 动物生殖细胞膜融合相关机制 | 第18-25页 |
| ·卵子表面的精卵融合相关蛋白 | 第19-21页 |
| ·精子上的精卵融合相关蛋白因子 | 第21-24页 |
| ·精卵融合有关的酶 | 第24页 |
| ·精卵相互作用有关的抗原 | 第24-25页 |
| 5 植物配子融合相关机制 | 第25-26页 |
| 6 展望 | 第26-27页 |
| 第二部分 研究论文 | 第27-101页 |
| 第一章 大鼠Crisp2和Pdia3的cDNA的克隆 | 第27-44页 |
| 前言 | 第27页 |
| 1 材料与方法 | 第27-31页 |
| ·主要实验器材 | 第27-28页 |
| ·载体与苗种 | 第28页 |
| ·实验试剂与方法 | 第28-31页 |
| 2 结果 | 第31-41页 |
| ·大鼠附睾、睾丸组织总RNA的提取 | 第31-32页 |
| ·大鼠Crisp2和Pdia3的PCR产物琼脂糖凝胶电泳鉴定 | 第32-33页 |
| ·pMD19-T重组载体的双酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·大鼠PDIA3和CRISP2 cDNA结构分析 | 第34页 |
| ·大鼠PDIA3和CRISP2氨基酸序列的分析 | 第34-36页 |
| ·大鼠PDIA3和CRISP2的二级结构和性质以及三维结构预测 | 第36-41页 |
| 3 讨论 | 第41-44页 |
| 第二章 大鼠CRISP2和PDIA3融合蛋白的原核表达及纯化 | 第44-57页 |
| 前言 | 第44页 |
| 1 材料和方法 | 第44-50页 |
| ·材料 | 第44-46页 |
| ·实验方法 | 第46-50页 |
| 2 结果 | 第50-56页 |
| ·Pdia3和Crisp2全长测序结果分析(见第一章结构分析) | 第50-51页 |
| ·大鼠Pdia3和Crisp2 PCR产物、重组克隆T载体的构建及pET32a-Crisp2、pGEX4T-1-Pdia3重组载体酶切鉴定 | 第51-52页 |
| ·pET32a-CRISP2、pGEX4T-1-PDIA3在大肠杆菌中的诱导表达与His-CRISP2、GST-PDIA3融合蛋白的Western-blot鉴定 | 第52-55页 |
| ·纯化后的His-CRISP2和GST-PDIA3融合蛋白浓度的测定 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-57页 |
| 第三章 小鼠抗大鼠CRISP2和PDIA3腹水多克隆抗体的制备及纯化 | 第57-66页 |
| 前言 | 第57-58页 |
| 1 材料和方法 | 第58-61页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·实验方法 | 第58-61页 |
| 2 结果 | 第61-64页 |
| ·小鼠抗GST-PDIA3和His-CRISP2多克隆抗体的鉴定 | 第62页 |
| ·大鼠PDIA3和CRISP2纯化抗体特异性测定 | 第62-63页 |
| ·CRISP2、PDIA3抗体的效价测定 | 第63-64页 |
| 3 讨论 | 第64-66页 |
| 第四章 大鼠PDIA3和CRISP2蛋白在其睾丸组织和精子中的定位 | 第66-74页 |
| 前言 | 第66页 |
| 1 材料和方法 | 第66-69页 |
| ·材料 | 第66-68页 |
| ·实验方法 | 第68-69页 |
| 2 结果 | 第69-72页 |
| ·大鼠睾丸组织中PDIA3和CRISP2的定位 | 第69-71页 |
| ·大鼠PDIA3和CRISP2在精子细胞顶体反应前后不同形态的免疫化学定位 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-74页 |
| 第五章 大鼠PDIA3、CRISP2酵母双杂交作用的研究 | 第74-87页 |
| 前言 | 第74页 |
| 1 材料与方法 | 第74-79页 |
| ·试剂 | 第74-76页 |
| ·实验方法 | 第76-79页 |
| 2 结果 | 第79-85页 |
| ·大鼠Pdia3和Crisp2的PCR凝胶电泳 | 第79-80页 |
| ·pGADT7和pGBKT7酶切鉴定 | 第80-81页 |
| ·Y2H和Y187双杂交目的阳性菌凝胶电泳鉴定 | 第81-82页 |
| ·酵母菌Y187和Y2H Gold交配 | 第82-83页 |
| ·SD/-Leu or如/-Trp的菌落生长结果 | 第83页 |
| ·SD/-Leu/-Trp的菌落生长结果 | 第83-84页 |
| ·SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-a -Ga/Aba (QXA)的菌落生长结果 | 第84-85页 |
| 3 讨论 | 第85-87页 |
| 第六章 大鼠PDIA3和CRISP2蛋白相互作用的研究 | 第87-101页 |
| 前言 | 第87-88页 |
| 1 材料与方法 | 第88-92页 |
| ·实验器材 | 第88页 |
| ·实验方法 | 第88-92页 |
| ·试剂 | 第88页 |
| ·引物的设计与合成 | 第88-89页 |
| ·pcDNA表达载体的构建 | 第89-90页 |
| ·293T细胞的培养 | 第90页 |
| ·细胞共转染 | 第90-91页 |
| ·细胞转染后目的蛋白收集 | 第91页 |
| ·免疫共沉淀 | 第91页 |
| ·目的蛋白的Western blot检測 | 第91-92页 |
| 2 结果 | 第92-99页 |
| ·PCR产物凝胶电泳分析鉴定 | 第92页 |
| ·pcDNA3.1表达载体的构建及双酶切分析 | 第92-94页 |
| ·目的蛋白Western blot结果 | 第94-99页 |
| 3 讨论 | 第99-101页 |
| 结论 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 攻读博士学位期间参与的科研项目和发表的学术论文 | 第10页 |
