| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-8页 |
| 引言 | 第8-10页 |
| 技术路线 | 第10-11页 |
| 第1章 材料和方法 | 第11-25页 |
| ·材料 | 第11-12页 |
| ·主要的仪器设备 | 第11页 |
| ·质粒、菌株与细胞株 | 第11页 |
| ·主要的实验试剂 | 第11-12页 |
| ·方法 | 第12-25页 |
| ·pSUPER-siCD46重组质粒的构建与鉴定 | 第12-19页 |
| ·pSUPER质粒的选择 | 第12-13页 |
| ·编码CD46 siRNA寡核苷酸序列的设计与合成 | 第13-14页 |
| ·寡核苷酸链的退火 | 第14页 |
| ·pSUPER空质粒的双酶切 | 第14-15页 |
| ·酶切产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第15页 |
| ·大分子片段的回收 | 第15-16页 |
| ·寡核苷酸链与线性载体的连接 | 第16页 |
| ·重组质粒pSUPER-siCD46转化E. coli.JM109 | 第16-17页 |
| ·菌种的保存与复苏 | 第17页 |
| ·试剂盒提取转化菌质粒 | 第17-18页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第18页 |
| ·PCR检测重组质粒和测序鉴定 | 第18-19页 |
| ·pSUPER-siCD59重组质粒的扩增和鉴定 | 第19-20页 |
| ·重组质粒pSUPER-siCD46转化E. coli.JM109 | 第19页 |
| ·质粒小提 | 第19页 |
| ·双酶切鉴定 | 第19-20页 |
| ·pSUPER-siCD46和pSUPER-siRNA分别稳定转染Jurkat细胞系 | 第20-23页 |
| ·转染包装细胞系PA317 | 第20页 |
| ·Jurakt细胞的复苏和培养 | 第20页 |
| ·细胞计数 | 第20-21页 |
| ·病毒上清稳定转染Jurkat | 第21页 |
| ·RT-PCR检测CD46和CD59mRNA表达 | 第21-22页 |
| ·Western blot检测CD46和CD59mRNA表达 | 第22-23页 |
| ·MTT法检测Jurakt细胞的增殖 | 第23-24页 |
| ·Western blot检测ZAP-70磷酸化水平 | 第24页 |
| ·统计学方法 | 第24-25页 |
| 第2章 结果 | 第25-32页 |
| ·pSUPER空质粒的双酶切 | 第25页 |
| ·pSUPER-siCD46重组质粒的鉴定 | 第25-26页 |
| ·质粒的双酶切鉴定 | 第25-26页 |
| ·PCR鉴定 | 第26页 |
| ·DNA序列鉴定 | 第26页 |
| ·pSUPER-siCD59重组质粒的双酶切鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组质粒转染PA317和Jurakt细胞 | 第27-28页 |
| ·RT-PCR检测mRNA的表达 | 第28-29页 |
| ·Western blot检测CD46,CD59蛋白的表达 | 第29-30页 |
| ·MTT结果 | 第30页 |
| ·ZAP-70磷酸化结果 | 第30-32页 |
| 第3章 讨论 | 第32-34页 |
| 第4章 结论 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-38页 |
| 综述 | 第38-52页 |
| 综述参考文献 | 第46-52页 |
| 硕士研究生期间发表的论文 | 第52-53页 |
| 附录 | 第53-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
