| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-32页 |
| 1 甲基化EGCG发现起源 | 第16-17页 |
| 2 甲基化EGCG资源化学研究 | 第17-18页 |
| 3 茶树中甲基化EGCG分析方法研究 | 第18-20页 |
| ·茶树中甲基化EGCG高效液相色谱分析 | 第19-20页 |
| ·甲基化EGCG的薄层色谱分析 | 第20页 |
| 4 茶树中甲基化EGCG分离纯化技术研究 | 第20-22页 |
| ·制备型高效液相色谱法 | 第21页 |
| ·Toyopearl HW-40S中压柱层析 | 第21-22页 |
| ·Sephadex LH-20凝胶柱层析 | 第22页 |
| ·高速逆流色谱(HSCCC)分离法 | 第22页 |
| 5 甲基化EGCG的合成 | 第22-26页 |
| ·化学修饰法 | 第23-24页 |
| ·重氮甲烷合成法 | 第23页 |
| ·碘甲烷合成法 | 第23页 |
| ·硫酸二甲酯合成法 | 第23-24页 |
| ·硝基苯磺酰基保护基团合成法 | 第24页 |
| ·苄基保护基团合成法 | 第24页 |
| ·酶法合成 | 第24-26页 |
| 6 EGCG代谢的甲基化产物研究 | 第26页 |
| 7 甲基化EGCG的功效以及功能原理研究 | 第26-30页 |
| ·抗过敏反应 | 第27-28页 |
| ·保护肝细胞冷藏伤害 | 第28页 |
| ·抗氧化和细胞毒素作用 | 第28-29页 |
| ·抑制脂肪加氧酶(15-LO)和结核分枝杆菌的作用 | 第29页 |
| ·抑制诱导型一氧化氮合成酶(iNOS) | 第29页 |
| ·抗肥胖及其机理 | 第29-30页 |
| ·降血压及其机理 | 第30页 |
| 8 本研究的目的与意义 | 第30-32页 |
| 第二章 高效液相色谱法同时测定茶叶中8种儿茶素、3种嘌呤碱和没食子酸 | 第32-41页 |
| 1 材料与方法 | 第32-33页 |
| ·试验仪器与设备 | 第32页 |
| ·试剂与材料 | 第32-33页 |
| ·试验方法 | 第33页 |
| ·对照品溶液的配置 | 第33页 |
| ·供试品溶液的制备 | 第33页 |
| ·流动相缓冲液的配置 | 第33页 |
| ·色谱条件 | 第33页 |
| ·对照品和供试品分析 | 第33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-39页 |
| ·流动相pH值的选择 | 第33-34页 |
| ·不同前处理方法的选择 | 第34-35页 |
| ·方法的线性范围 | 第35页 |
| ·方法的精密度 | 第35页 |
| ·检测限和定量限 | 第35-37页 |
| ·方法的回收率实验 | 第37页 |
| ·样品分析 | 第37-38页 |
| ·不同采摘季节茶树EGCG3"Me含量的变化 | 第38-39页 |
| ·不同成熟度叶片中EGCG3"Me含量的变化 | 第39页 |
| 3 讨论与小结 | 第39-41页 |
| 第三章 茶叶中甲基化EGCG分离纯化与结构鉴定 | 第41-50页 |
| 1 材料与方法 | 第41-44页 |
| ·试验仪器与设备 | 第41-42页 |
| ·试剂与材料 | 第42页 |
| ·试验方法 | 第42-44页 |
| ·甲基化EGCG的HPLC分析 | 第42页 |
| ·高效制备液相色谱条件 | 第42页 |
| ·紫外光谱测定 | 第42页 |
| ·化合物A和B的HPLC-MS分析 | 第42页 |
| ·核磁共振波谱分析 | 第42-43页 |
| ·HP-20树脂的预处理与再生 | 第43页 |
| ·甲基化EGCG粗提物的制备 | 第43-44页 |
| ·高纯甲基化EGCG分离与纯化工艺流程图 | 第44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-48页 |
| ·甲基化EGCG提取条件的选择与优化 | 第44-45页 |
| ·甲基化EGCG柱色谱分离条件的选择 | 第45页 |
| ·高效制备液相色谱分离制备甲基化EGCG条件的优化 | 第45-47页 |
| ·化合物A和B的结构鉴定与分析 | 第47-48页 |
| ·化合物A的结构鉴定与分析 | 第47页 |
| ·化合物B的结构鉴定与分析 | 第47-48页 |
| 3 讨论与小结 | 第48-50页 |
| 第四章 甲基化EGCG的化学合成、分离制备与结构鉴定 | 第50-60页 |
| 1 材料与方法 | 第50-52页 |
| ·试验仪器与设备 | 第50页 |
| ·试剂与材料 | 第50页 |
| ·试验方法 | 第50-52页 |
| ·甲基化EGCG化学合成制备方法 | 第50-51页 |
| ·化学合成甲基化EGCG的HPLC分析 | 第51页 |
| ·高效制备液相色谱条件 | 第51页 |
| ·分析型超临界流体色谱(SFC)的色谱条件 | 第51页 |
| ·制备型超临界流体色谱条件 | 第51页 |
| ·高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分析条件 | 第51-52页 |
| ·紫外光谱测定 | 第52页 |
| ·核磁共振波谱分析 | 第52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-57页 |
| ·甲基化试剂的选择 | 第52页 |
| ·化学合成甲基化EGCG条件的优化 | 第52页 |
| ·化学合成甲基化EGCG产物分析 | 第52-53页 |
| ·化学合成甲基化EGCG产物的高效制备液相色谱分离 | 第53页 |
| ·化学合成甲基化EGCG产物的制备型超临界流体色谱分离 | 第53-55页 |
| ·制备型超临界流体色谱制备的化合C和D的结构鉴定 | 第55-57页 |
| ·化合物C的结构鉴定与分析 | 第55-56页 |
| ·化合物D的结构鉴定与分析 | 第56-57页 |
| 3 讨论与小结 | 第57-60页 |
| ·化学合成法制备的甲基化EGCG产物分析 | 第57-58页 |
| ·甲基化EGCG单体分离条件的选择 | 第58-59页 |
| ·化合物的结构鉴定与分析 | 第59-60页 |
| 第五章 茶树中CsCOMT基因全长cDNA克隆与蛋白质特征分析 | 第60-78页 |
| 1 材料与方法 | 第60-66页 |
| ·试验仪器与设备 | 第60页 |
| ·试剂与材料 | 第60页 |
| ·引物 | 第60-61页 |
| ·试验方法 | 第61-66页 |
| ·总RNA提取、纯化及检测 | 第62页 |
| ·3’RACE反应 | 第62-63页 |
| ·5’RACE反应 | 第63-65页 |
| ·5’/3’RACE产物的克隆及测序 | 第65页 |
| ·CsCOMT基因全长序列验证 | 第65-66页 |
| ·CsCOMT基因的生物信息学分析 | 第66页 |
| 2 结果与分析 | 第66-76页 |
| ·总RNA纯度与完整性 | 第66页 |
| ·CsCOMT基因全长cDNA克隆 | 第66-69页 |
| ·CsCOMT基因3’端序列的扩增 | 第66-67页 |
| ·CsCOMT基因5’端序列的扩增 | 第67-68页 |
| ·CsCOMT基因全长cDNA序列的获得 | 第68-69页 |
| ·CsCOMT蛋白质特征分析 | 第69-76页 |
| ·CsCOMT的ORF及其氨基酸序列的预测 | 第69页 |
| ·氨基酸序列的同源性分析 | 第69-70页 |
| ·CsCOMT氨基酸组成及理化性质分析 | 第70页 |
| ·CsCOMT蛋白亲水/疏水性分析 | 第70-71页 |
| ·CsCOMT蛋白信号肽预测 | 第71-72页 |
| ·CsCOMT磷酸化位点预测与分析 | 第72页 |
| ·CsCOMT亚细胞定位预测与分析 | 第72页 |
| ·CsCOMT蛋白二级结构的预测与分析 | 第72-74页 |
| ·CsCOMT蛋白卷曲螺旋结构的预测与分析 | 第74页 |
| ·CsCOMT蛋白的跨膜结构预测与分析 | 第74-75页 |
| ·CsCOMT蛋白的三级结构预测 | 第75页 |
| ·CsCOMT蛋白的系统发育树分析 | 第75-76页 |
| 3 讨论与小结 | 第76-78页 |
| 第六章 茶树CsCOMT基因的原核表达研究及荧光定量PCR分析 | 第78-87页 |
| 1 材料与方法 | 第78-82页 |
| ·仪器与设备 | 第78页 |
| ·试剂与材料 | 第78-79页 |
| ·引物 | 第79页 |
| ·试验方法 | 第79-82页 |
| ·总RNA提取 | 第79页 |
| ·CsCOMT基因的克隆 | 第79-80页 |
| ·pMD18-CsCOMT与pET 28α表达载体双酶切 | 第80页 |
| ·pET-28α-CsCOMT质粒构建 | 第80-81页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第81页 |
| ·酶促反应试验 | 第81页 |
| ·酶促反应产物的HPLC | 第81页 |
| ·荧光定量PCR检测CsCOMT基因表达量 | 第81-82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-85页 |
| ·重组质粒载体的构建 | 第82-83页 |
| ·CsCOMT基因PCR产物纯化 | 第82页 |
| ·pMD18-CsCOMT与pET28α载体的双酶切检测 | 第82-83页 |
| ·重组蛋白检测 | 第83页 |
| ·酶促试验结果 | 第83-84页 |
| ·荧光定量PCR分析CsCOMT基因表达水平 | 第84-85页 |
| 3 讨论与小结 | 第85-87页 |
| 全文总结 | 第87-90页 |
| 1 主要研究结果 | 第87-88页 |
| 2 研究展望 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-101页 |
| 附图 | 第101-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 作者简介 | 第114-116页 |
